食品中金霉素殘留的膠體金免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、本文研究膠體金免疫層析法（試紙條）與斑點(diǎn)金免疫滲濾法快速檢測(cè)食品中金霉素殘留。采用戊二醛交聯(lián)法和混合酸酐法制備了金霉素-BSA 免疫抗原，戊二醛交聯(lián)法制備了金霉素-明膠免疫抗原。分別將三種不同的免疫抗原按照常規(guī)免疫程序免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，酶聯(lián)免疫吸附法鑒定出多抗中含有抗金霉素的特異性抗體，金霉素-BSA 免疫抗原產(chǎn)生的ELISA 效價(jià)最高達(dá)320 000。親和力實(shí)驗(yàn)證明戊二醛法制備的免疫抗原產(chǎn)生的抗體對(duì)金霉素的親和性要高于混

2、合酸酐法制備的免疫抗原產(chǎn)生的抗體對(duì)金霉素的親和性。 在膠體金免疫層析法中，將羊抗兔抗體和金霉素-明膠包被抗原包被在硝酸纖維素膜上，分別作為質(zhì)控線和檢測(cè)線，組裝試紙條。包被在硝酸纖維素膜上的金霉素-明膠固相抗原與被測(cè)溶液中游離金霉素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合膠體金標(biāo)記的抗金霉素多克隆抗體，通過(guò)可見的線條顏色深淺判斷結(jié)果。在斑點(diǎn)金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)中，將制備的金霉素多克隆抗體包被在硝酸纖維素膜上，用以競(jìng)爭(zhēng)捕獲膠體金標(biāo)記的金霉素-BSA 包被抗原和樣品中游離

3、金霉素, 通過(guò)可見的斑點(diǎn)顏色深淺判斷結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明試紙條法的檢測(cè)限為0.7 μg/mL，在金霉素濃度為0.6～1.0μg/mL 范圍內(nèi)可實(shí)現(xiàn)定量分析。在四環(huán)素濃度大于1.0 μg/mL 時(shí)，與金霉素存在交叉反應(yīng)性，其結(jié)果與高效液相測(cè)定結(jié)果一致。斑點(diǎn)滲濾方法的檢測(cè)限為0.4 μg/mL，在金霉素濃度為0.6～1.0 μg/mL 范圍內(nèi)可實(shí)現(xiàn)定量分析，其結(jié)果與酶聯(lián)免疫方法的測(cè)定結(jié)果一致。試紙條法與斑點(diǎn)滲濾法均可應(yīng)用于食品中金霉素殘留的快