食品中新霉素獸藥殘留酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、本論文對(duì)獸藥新霉素的酶聯(lián)免疫分析方法進(jìn)行了研究。采用碳化二亞胺法(EDC)將新霉素與匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)連接制得免疫原免疫兔子,制備出高效價(jià)和高特異性的新霉素多克隆抗體。采用碳化二亞胺法(EDC)與辣根過氧化物酶連接制得酶標(biāo)抗原,建立了一種高靈敏度直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法,IC50為1.0±0.2μg/L,溶液中的最低檢測(cè)限(IC15)為0.1±0.01μg/L,低于以往關(guān)于新霉素直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA分析方法的報(bào)道,并對(duì)方法的精密度進(jìn)

2、行了考察,板內(nèi)變異和板間變異的變異系數(shù)均低于20％。由于新霉素在畜牧業(yè)生產(chǎn)中廣為使用,因此在動(dòng)物源性食品中殘留較多,故將所建立的方法應(yīng)用于所選取的牛奶、豬肉、魚肉、雞肉、雞蛋和豬腎六種樣品中新霉素殘留的快速檢測(cè),詳細(xì)考查了不同樣品基質(zhì)對(duì)ELISA方法的影響及其去除方法,新霉素的最低檢出限均低于最低殘留限量(500 μg/kg或μg/L),分別對(duì)新霉素在六種實(shí)際樣品中的添加回收率進(jìn)行實(shí)驗(yàn),回收率平均可達(dá)到75％～105％,可滿足國(guó)標(biāo)檢測(cè)方

3、法對(duì)檢測(cè)靈敏度的要求,也可滿足快速篩選方法的要求。
　　 因?yàn)樾旅顾責(zé)o發(fā)色團(tuán),在紫外和熒光條件下無法被檢測(cè)到,故需采用衍生的方法。選擇鄰苯二甲醛和巰基乙醇對(duì)新霉素進(jìn)行衍生,研究了衍生反應(yīng)的試驗(yàn)條件,建立了檢測(cè)動(dòng)物源性樣品中新霉素殘留的高效液相色譜檢測(cè)方法,采用液相色譜法對(duì)建立的新霉素直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性很高,線性相關(guān)系數(shù)R2值在0.9以上。
　　 進(jìn)一步對(duì)新霉素抗體和酶標(biāo)抗