FAP-α介導的酶激活式抗腫瘤前體藥物的體外藥效學研究.pdf

1、現(xiàn)今臨床常用的抗腫瘤手段主要以化療為主，其中多數(shù)藥物對腫瘤組織缺乏選擇性，在殺傷腫瘤細胞的同時常不可避免地損傷正常細胞，從而導致毒副作用發(fā)生。因此，提高藥物與腫瘤局部的接觸可改善治療效果，其中一種有效的方法是合成只有在腫瘤局部才能被激活的前體藥物。 成纖維細胞活化因子-α(Fibroblast Activation Protein-α，F(xiàn)AP-α)是特異性表達于腫瘤相關成纖維細胞(CAF)表面的抗原分子，故將FAP-α作為腫瘤靶

2、向治療的靶標具有可行性。FAP-α具有腫瘤間質(zhì)特異性高表達的特性和肽鍵專性肽鏈內(nèi)切酶活性，利用FAP-a的專一性底物N．芐氧基羰基．甘氨酰脯氨酸為導向載體，將其游離羧基對阿霉素的游離氨基進行?；?，即可合成攜帶有FAP-a選擇性水解的二肽結(jié)構(gòu)的酶激活式前體藥物Z-GP-Dox，該前體藥物的設計策略可為實現(xiàn)抗腫瘤藥物靶向性治療提供可能。本實驗主要對抗腫瘤前體藥物Z-GP-Dox的體外藥效學特性進行了研究。 目的：體外檢測FAP-α介

3、導的酶激式靶向抗腫瘤前體藥物Z-GP-Dox的細胞毒性、酶激活式靶向性釋放特性及血清穩(wěn)定性，為進一步開展體內(nèi)及臨床靶向性抗腫瘤藥物試驗提供可靠的實驗依據(jù)。 方法： 1、驗證細胞及組織中FAP-α的表達利用RT-PCR、Western Blotting及免疫組織化學法檢測EF細胞、MCF-7細胞、正常組織及腫瘤組織中FAP-α的表達。 2、檢測前體藥物的細胞毒性MTT法檢測前體藥物與母體藥物對阿霉素(Dox)敏感細

4、胞株K562細胞及MOLT-4細胞的毒性。 3、檢測FAP-α特異性酶切后前體藥物細胞毒性的改變將前體藥物Z-GP-Dox分別與FAP-α表達陽性細胞-EF細胞(胚胎成纖維細胞)及FAP-α表達陰性細胞-MCF-7細胞共孵育不同時間，將孵育后的上清作用于K562細胞及MOLT-4細胞，MTT法檢測細胞存活率。 4、驗證FAP-α對前體藥物水解的特異性FAP-α特異性自身抗體與EF細胞共孵育24、48小時后，再與前體藥物Z

5、-GP-Dox繼續(xù)共孵育24小時，最后將共孵育上清作用于K562細胞，MTT法檢測上清對K562細胞的毒性。 5、檢測前體藥物的血清穩(wěn)定性前體藥物Z-GP-Dox與正常人或腫瘤患者血清共孵育不同時間，然后將孵育上清作用于K562細胞，MTT法檢測細胞存活率。 結(jié)果： 1、FAP-α在EF細胞及乳腺癌組織中表達陽性，而在體外培養(yǎng)的MCF-7細胞及正常組織中表達陰性。 2、與Dox相比，前體藥物Z-GP-Do

6、x對K562細胞的毒性下降至1/4～1/14，對MOLT-4細胞的毒性下降至1/9～1/22。 3、Z-GP-Dox與EF細胞共孵育后細胞毒性明顯增強，而與MCF-7共孵育后細胞毒性未明顯增強。 4、經(jīng)FAP-α特異性抗體封閉后可明顯阻斷EF細胞誘導的Z-GP-Dox的細胞毒性釋放。 5、前體藥物與正常人或腫瘤患者血清共孵育后其細胞毒性未明顯改變。 結(jié)論： 1)Z-GP-Dox是利用FAP-α的專