rhCNB抗腫瘤藥效學(xué)評價及相關(guān)機制初步研究.pdf

1、在正常機體的免疫系統(tǒng)監(jiān)控及調(diào)節(jié)下，腫瘤細(xì)胞必須具備克服機體免疫監(jiān)控的能力才能存活。當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生了免疫逃逸時就將不受控制迅速增長并形成腫瘤內(nèi)環(huán)境，成為腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等過程發(fā)生而不被監(jiān)視的避風(fēng)港。機體的免疫力下降降低了對腫瘤細(xì)胞的監(jiān)控，加劇了腫瘤細(xì)胞的生長。因此，在腫瘤的發(fā)生過程中加強機體的免疫調(diào)節(jié)已成為癌癥防治的重要策略。重組人鈣調(diào)蛋白磷酸酶 B亞基作為基因工程的創(chuàng)新藥物，能通過調(diào)節(jié)免疫功能達(dá)到抗腫瘤作用。因此，我們通過建立不同的抗腫瘤

2、藥效學(xué)模型來評價基因工程抗腫瘤新藥 rhCNB機體免疫調(diào)節(jié)及抗癌作用的效果。
　　本研究初步探討了rhCNB體外抗腫瘤機制。在MTT實驗中發(fā)現(xiàn)rhCNB高濃度暴露時對腫瘤的生長有一定的抑制作用，而在較低劑量時對腫瘤的生長作用影響較小。本實驗室建立細(xì)胞共培養(yǎng)模型，將攜帶 Luc的目的基因的腫瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，在巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的比例（效靶比）為20：1時效果最佳。以此為基礎(chǔ)，在20:1的效靶比中加入不同濃度的受

3、試藥rhCNB，相比單獨給藥時，達(dá)到相同的抑制率時所用的藥物濃度有所下降。同時，運用ELISA檢測細(xì)胞共培養(yǎng)上清中 TNF-α的含量較單獨作用時有所增加。對小鼠巨噬細(xì)胞Q-PCR檢測中，rhCNB能有效上調(diào)部分趨化因子和炎性因子，使巨噬細(xì)胞向 M1的轉(zhuǎn)變激發(fā)機體的天然免疫應(yīng)答過程，參與機體的細(xì)胞與體液免疫調(diào)節(jié)。所以對于rhCNB抗腫瘤的機制，我們初步認(rèn)為是通過調(diào)節(jié)天然免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤作用的。
　　在體內(nèi)動物水平上，通過Cy7標(biāo)記

4、藥物進(jìn)行活體熒光成像觀察rhCNB在動物體內(nèi)的分布代謝發(fā)現(xiàn)，rhCNB以肝臟分布為主，有部分在脾臟中，且rhCNB隨時間逐漸代謝。同時采用建立皮下殘瘤、原位移植瘤等動物模型進(jìn)行 rhCNB抗腫瘤藥效學(xué)的評價。實驗結(jié)果說明rhCNB能夠有效抑制S180肉瘤、人肝癌HepG2原位實體瘤的生長。受試藥進(jìn)行隔天給藥，且在實驗過程中受試藥的不同劑量組的動物均未出現(xiàn)死亡顯現(xiàn)。在KM小鼠荷S180肉瘤殘瘤模型的實驗中，rhCNB的高、中、低（40mg

5、/kg、20mg/kg、10mg/kg）組的瘤重抑制率在58.9%~75.3%范圍。在人肝癌HepG2原位移植瘤中的瘤重抑制率范圍為：38.0%~75.0%。實驗結(jié)果顯示，rhCNB對腫瘤的生長具有抑制作用。
　　綜上所述，受試藥rhCNB毒性小，安全性好，能通過刺激機體免疫細(xì)胞功能殺傷腫瘤細(xì)胞，提高受試藥在荷瘤小鼠模型中的抑瘤生長的抑制效應(yīng)。對于rhCNB抗腫瘤藥效學(xué)的評價和機制的初步探索的研究，不僅為rhCNB作為一類抗腫瘤創(chuàng)