抑制Notch信號(hào)對(duì)骨髓瘤細(xì)胞增殖抑制的分子機(jī)理研究.pdf

1、目的：了解Notch信號(hào)在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)情況，探討調(diào)節(jié)該信號(hào)對(duì)腫瘤增殖、凋亡的影響及可能的機(jī)制，為骨髓瘤靶向治療的開(kāi)展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)Notch1及Hes1在骨髓瘤細(xì)胞株中的表達(dá)；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Notch信號(hào)相關(guān)受體Notch1-3、配體Jag1、Jag2及特異性靶基因Hes1在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞U266及RPMI8226中的表達(dá)，并與健康供者來(lái)源淋巴細(xì)胞表達(dá)情況進(jìn)行比較；以Jag

2、2、Hes1為指標(biāo)，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PHI處理對(duì)骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞株Notch信號(hào)表達(dá)的影響；MTT檢測(cè)抑制Notch信號(hào)對(duì)瘤細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期改變，以DAPI法觀察瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，AnnexinV-FITC染色后流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)抑制Notch信號(hào)后PTEN、mTOR在骨髓瘤中的表達(dá)改變。
　　 結(jié)果：細(xì)胞免疫化學(xué)染色結(jié)果示Hes1在兩種骨髓瘤中均為陽(yáng)性。實(shí)時(shí)熒

3、光定量PCR發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)在骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)高于健康供者來(lái)源細(xì)胞，其中，Jag2、Hes1在兩種骨髓瘤中的表達(dá)量較健康供者來(lái)源淋巴細(xì)胞高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。PHI處理后，RPMI8226細(xì)胞株Jag2、Hes1表達(dá)量均出現(xiàn)劑量依賴性降低，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。抑制Notch信號(hào)后骨髓瘤細(xì)胞增殖受抑；S期細(xì)胞明顯減少，細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期；出現(xiàn)凋亡；細(xì)胞中PTEN表達(dá)量升高，mTOR表達(dá)量降低，與

4、對(duì)照組相比，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：(1)Notch信號(hào)在多發(fā)性骨髓瘤U266、RPMI8226細(xì)胞中存在異常高表達(dá)，這可能是配體異?；罨斐傻?；
　　 (2)PHI可抑制Notch信號(hào)在多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞中的表達(dá)；
　　 (3)抑制Notch信號(hào)可使骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞增殖受抑、細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，發(fā)生凋亡；
　　 (4)通過(guò)抑制Notch信號(hào)抑制腫瘤