SCN5A基因多態(tài)性與心臟性猝死的相關(guān)性研究.pdf

1、【研究背景】
　　心臟性猝死(Suddencardiacdeath,SCD),是法醫(yī)病理學(xué)檢案和研究的重要內(nèi)容。已有的研究表明,在SCD的發(fā)生的病因中冠心病占第一位,此外還有心肌炎、心肌病、先天性冠脈發(fā)育異常、風(fēng)濕性心臟病、主動脈夾層等。上述疾病所引起的猝死,通過系統(tǒng)的尸體解剖及法醫(yī)病理學(xué)檢查均可以明確診斷;但仍有較多SCD發(fā)生者,通過詳細(xì)的病理形態(tài)學(xué)檢查不能明確死亡病因,這類案例以往被稱為陰性解剖(Negativeautopsy

2、)和不明原因的心臟性猝死(Unexplainedsuddencardiacdeath),目前認(rèn)為,此類案例與致死性心律失常的發(fā)生有關(guān),由于該類死亡心臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,常規(guī)的法醫(yī)病理學(xué)檢查難以確定死因,給法醫(yī)病理學(xué)診斷帶來困難,通常引起糾紛,此類案件的發(fā)生率在國外約6％,國內(nèi)由北京阜外醫(yī)院牽頭本單位參加所報道的697例SCD的統(tǒng)計分析中,該類案例占10%,是目前SCD病因診斷研究的重點(diǎn)。
　　過去幾十年,由于分子遺傳學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)

3、的發(fā)展,人們對不明原因的SCD有了新的認(rèn)識。許多研究表明,該類疾病的發(fā)生與基因變異引起的離子通道異常有關(guān),由于基因變異導(dǎo)致編碼相應(yīng)離子通道的蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而引發(fā)致死性心律失常。目前報道的此類異常有鈉離子通道和鉀離子通道疾病等,這類疾病主要包括有:長QT綜合征(longQTsyndrome,LQTS)、Brugada綜合征(Brugadasyndrome,BS)、兒茶酚胺敏感多態(tài)性室速(Catecholaminergicpolymo

4、rphicventriculartachycardia,CPVT)和短QT綜合征(shortQTSyndrome,SQTS)?，F(xiàn)有的研究表明,青壯年猝死綜合征、嬰兒猝死綜合征的發(fā)生均與SCN5A基因變異引起的心肌鈉離子通道異常有關(guān)。
　　SCN5A基因編碼心臟Na+通道的成孔亞單位,負(fù)責(zé)心臟動作電位的快速除極,在控制心肌細(xì)胞的興奮的傳導(dǎo)和維持中起著關(guān)健作用。大量研究證實SCN5A的突變可導(dǎo)致多種致死性的家族性心律失?！，F(xiàn)有的研究表

5、明,由SCN5A基因突變導(dǎo)致的心率失常按Na+通道功能改變可以分成兩類,一類是功能增強(qiáng)型突變?nèi)玳LQT綜合征3型;另外一類是功能減低型突變,包括Brugada綜合征,心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)疾病如病態(tài)竇房結(jié)綜合征等。目前SCN5A已成為心臟分子遺傳學(xué)及法醫(yī)病理學(xué)研究的重點(diǎn)及熱點(diǎn),許多心臟的電生理學(xué)研究表明,SCN5A基因突變引起致死性心律失常是青壯年猝死發(fā)生重要病因。此外,也有研究證實SCN5A基因的一些常見單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(singlenucleo

6、tidepolymorphisms,SNP)變異也能引起心肌細(xì)胞Na+通道發(fā)生變化從而增加該類患者心律失常發(fā)生的易感性。2002年Splawski等首先報道了非裔美籍人中SCN5A的多態(tài)位點(diǎn)Y1102,2005年AllenBurke等證實SCN5A多態(tài)位點(diǎn)Y1102的變異與非裔美籍人中不明原因SCD(心臟正常,或者輕度-中度的肥大)的發(fā)生有關(guān)。大量的研究已經(jīng)表明,SNP存在種族及地區(qū)差異,在高加索人和亞洲人中沒有檢測到SCN5A多態(tài)性位

7、點(diǎn)Y1102。目前已經(jīng)報道的SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)主要來自歐美的高加索人群和日本人群,國內(nèi)周峰、成建定等報道了中國人SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)H558R、R1193Q、C5457T及3666+69G﹥C,并且認(rèn)為SCN5A基因多態(tài)位點(diǎn)5457C、3666+69C是中國南方人群青壯年猝死綜合征發(fā)生的易感基因。
　　本課題組在湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心2002年至2012年10年SCD(980例)的統(tǒng)計分析中,發(fā)現(xiàn)不明原因的SCD約90例

8、。本次實驗選取2009年至2010年的34例不明原因的SCD案例,這些案例有些發(fā)生在睡眠中,有的發(fā)生在日常活動中,有些為運(yùn)動中猝死或遭受輕微外傷之后,其發(fā)生與SCN5A基因變異是否具有相關(guān)性,未見有類似報道,本研究通過對該類案例SCN5A基因的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行觀察,分析該類死亡案例死亡與SCN5A基因多態(tài)性變異的關(guān)系,為法醫(yī)病理學(xué)死因診斷提供依據(jù),為臨床上SCD的預(yù)防提供參考。
　　【目的】
　　本研究收集湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)司法鑒

9、定中心的不明原因SCD案例,提取基因組總DNA,應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù),通過對SCN5A基因多態(tài)性變異位點(diǎn)進(jìn)行觀察,分析該類死亡案例與SCN5A基因多態(tài)性變異的關(guān)系,為法醫(yī)病理學(xué)診斷該類案例死因提供依據(jù),為臨床上SCD的預(yù)防提供參考。
　　【研究對象和方法】
　　1.研究對象分組
　　不明原因SCD組:收集2009年至2010年間湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心尸檢保存的蠟塊及血液樣本。病例入選標(biāo)準(zhǔn):平素身體健康,詳細(xì)的法

10、醫(yī)病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)有可解釋死因的病理形態(tài)學(xué)改變,毒化檢驗陰性,心臟結(jié)構(gòu)及形態(tài)學(xué)正常,可有輕度肥厚,排除傳導(dǎo)系統(tǒng)出血及炎性病變。符合上述條件案例共34例,年齡16-45歲之間。
　　對照組:來自湖北同濟(jì)法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心親子鑒定無親緣關(guān)系的個體(血樣)50例,年齡18～43歲之間,無暈厥和心律失常病史,體格檢查正常。
　　2.確定研究SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn):根據(jù)Iwasa、Chen及周峰報道的SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)選取H5

11、58R、C5457T為觀察位點(diǎn)。
　　3.不明原因SCD組選取蠟塊或者保存血液標(biāo)本,應(yīng)用DNA提取試劑盒提取基因組總DNA;健康對照組取外周血白細(xì)胞,采用常規(guī)酚-氯仿法提取基因組總DNA。
　　4.PCR擴(kuò)增,根據(jù)NCBI(http://www.ncbi.ie/),獲取SCN5A基因(GeneballkNM000335)序列,利用primerprimers軟件設(shè)計相應(yīng)的引物,擴(kuò)增包含H558R、C5457T多態(tài)位點(diǎn)的片段。<

12、br>　　5.所有研究樣本的多態(tài)位點(diǎn)及基因型的檢測均采用限制性片段長度的多態(tài)性(RFLP)的方法進(jìn)行分析,以McrI、AcyI限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切。
　　6.統(tǒng)計分析采用SPSS18.0軟件。數(shù)據(jù)計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間比較計數(shù)資料采用x2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　【結(jié)果】
　　1.SCN5A基因位點(diǎn)H558R及C5457T在中國健康人群中存在有多態(tài)性,其少見等位基因頻率分別為9.0%、39

13、.0%。
　　2.通過單變量分析,不明原因SCD組SCN5A的2個SNP位點(diǎn)(H558R,C5457T)與健康對照組相比,多態(tài)位點(diǎn)H558R的基因型頻率存在明顯差異(P=0.04);多態(tài)位點(diǎn)C5457T的基因型頻率無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.961)。
　　【結(jié)論】
　　SCN5A多態(tài)位點(diǎn)H558R可能與不明原因SCD發(fā)生相關(guān);其H等位基因可能是SCD的保護(hù)基因;R等位基因可能是SCD發(fā)生的易患基因。法醫(yī)病理學(xué)檢查中,檢測H