半夏瀉心湯含藥血清抑制胃癌細胞上清對人腹膜間皮細胞損傷的研究.pdf

1、目的：通過研究半夏瀉心湯含藥血清抑制胃癌細胞（BGC-823）上清對人腹膜間皮細胞（HMrSV5）損傷的影響，探討半夏瀉心湯含藥血清干預(yù)胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的作用及其相關(guān)機制。
　　方法：收集胃癌細胞（BGC-823）分泌的上清液與人腹膜間皮細胞（HMrSV5）共培養(yǎng)在正常兔血清基后分別用100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL濃度的半夏瀉心湯含藥兔血清進行干預(yù)。實驗分組為對照組（正常腹膜間皮細胞），模型組（接觸胃癌細胞上清的

2、腹膜間皮細胞），100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL半夏瀉心湯含藥血清組。（1）光鏡下觀察各組細胞形態(tài)及細胞結(jié)構(gòu)的變化；（2）MTT法檢測各組細胞的生長活性；（3）流式細胞儀及熒光染色檢測各組細胞增殖凋亡變化；（4）檢測各組細胞上清氧化應(yīng)激指標SOD、MDA、GSH的水平；（5）Western Blot法檢測各組細胞中Bcl-2、Bax、TGF-β1蛋白含量的變化；（6）ELISA法檢測各組細胞上清中的TGF-β1蛋白的

3、表達。
　　結(jié)果：（1）接觸胃癌細胞上清的間皮細胞隨著半夏瀉心湯含藥血清濃度的2倍遞增，形態(tài)由松散細長的纖維狀逐漸的變圓呈緊密排列，細胞間骨架由細小的微絲逐漸變多裸區(qū)逐漸消失；
　?。?）熒光染色顯示接觸胃癌細胞上清后的間皮細胞顏色多為橙紅色并有核破裂現(xiàn)象，隨著藥物血清的干預(yù)細胞凋亡率隨著藥物濃度的遞增逐漸下降；
　?。?）經(jīng)胃癌上清干預(yù)后的間皮細胞MTT還原能力低于其他組別，隨著藥物濃度的遞增，受胃癌上清干預(yù)后的腹膜

4、間皮細胞還原能力逐漸遞增；
　?。?）氧化應(yīng)激指標顯示對照組中MDA水平最低，SOD、GSH水平最高，100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL半夏瀉心湯含藥血清組中MDA的水平由高到低依次排列但均低于模型組，SOD、GSH水平均高于模型組；
　　（5）流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示接觸胃癌上清的間皮細胞與對照組相比，G0/G1/G2/M比例由53.5％增長至79.3%，S期比例由46.5%降低至20.7%，不同濃度的含藥

5、血清組與模型組相比G0/G1/G2/M比例，隨著濃度的遞增有逐漸降低的趨勢，S期比例逐漸升高；
　?。?）免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，胃癌上清能夠誘導(dǎo)腹膜間皮細胞低表達Bcl-2高表達Bax、TGF-β1蛋白，經(jīng)半夏瀉心湯藥物血清干預(yù)后Bcl-2蛋白表達有所上升，Bax及TGF-β1蛋白表達隨著藥物濃度的遞增逐漸降低并呈濃度依賴性；
　?。?）ELISA法檢測結(jié)果顯示接觸胃癌上清的間皮細胞TGF-β1含量與對照組相比明顯升高；1