黃連含藥血清對巨噬細胞及其泡沫細胞極化的影響.pdf

1、目的:
　　本實驗觀察黃連含藥血清對巨噬細胞（Mφ）、M1/M2型Mφ及泡沫細胞炎癥因子的影響，探討黃連治療動脈粥樣硬化(AS)機制，為黃連臨床用藥提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)提取小鼠骨髓源單核細胞，誘導其分化為Mφ、M1/M2型Mφ及泡沫細胞，流式細胞儀和油紅O染色鑒定細胞特征。
　　(2)采用黃連高、中、低劑量水煎劑灌胃干預SD大鼠，常規(guī)制備含藥血清。經(jīng)MTT法篩選適當濃度含藥血清分別與Mφ、M1/

2、M2型Mφ及泡沫細胞共同孵育24 h。
　　(3) ELISA法測定細胞上清液中TNF-α和TGF-β含量;流式細胞儀檢測CD16/32、CD206的表達。
　　結果:
　　(1)與正常血清對照組比較:低劑量含藥血清干預組中M1/M2型Mφ分泌TNF-α顯著降低（P＜0.05）、分泌TGF-β顯著升高（P＜0.01）;Mφ分泌TNF-α、TGF-β顯著升高(P＜0.01)。中劑量含藥血清干預組M1型Mφ分泌TNF-α顯

3、著升高(P＜0.01); M2型Mφ和Mφ分泌TNF-α顯著降低(P＜0.01)、TGF-β顯著升高(P＜0.01)。高劑量含藥血清干預組M1型Mφ分泌TGF-β顯著降低(P＜0.01); M2型Mφ分泌TNF-α顯著升高(P＜0.05)。黃連高、中、低劑量含藥血清均促進泡沫細胞分泌TGF-β，而對TNF-α分泌無顯著差異。
　　(2)含藥血清組相互比較:低劑量干預組中M1型Mφ分泌TNF-α顯著降低(P＜0.01)、TGF-β顯

4、著升高(P＜0.05); Mφ與泡沫細胞分泌TGF-β顯著升高(P＜0.01)。中劑量干預組M1型Mφ分泌TGF-β顯著升高(P＜0.01)，Mφ和泡沫細胞分泌TNF-α顯著降低(P＜0.05)、分泌TGF-β顯著升高(P＜0.01)。中、低劑量組M2型Mφ分泌TNF-α顯著降低(P＜0.01)、TGF-β顯著升高(P＜0.01)。
　　(3)在Mφ、M1型Mφ中，高、中、低劑量黃連含藥血清組表達CD206顯著升高。而M2型Mφ、

5、泡沫細胞中，高、中、低劑量黃連含藥血清組表達CD206變化不明顯。說明黃連含藥血清可以促進Mφ、M1型Mφ向M2型巨噬細胞分化，增強其抗炎機制。而對M2型Mφ、泡沫細胞的分化則不顯著。
　　(4)在M2型Mφ、泡沫細胞中，高、中、低劑量黃連含藥血清組表達CD16/32顯著降低;在Mφ中，高、中劑量黃連含藥血清組表達CD16/32顯著降低;M1型Mφ中，高、中、低劑量含藥血清干預組表達CD16/32則不顯著。說明黃連含藥血清可以抑制

6、Mφ、M2型Mφ、泡沫細胞向M1型巨噬細胞分化，降低其抑炎作用。而對M1型Mφ的分化不顯著。
　　結果表明，低劑量黃連含藥血清可以最大限度的促進Mφ表達CD206，中劑量含藥血清可以最大限度促進M1型Mφ表達CD206，進而增加它們的抗炎作用。中劑量黃連含藥血清可以最大限度的抑制Mφ表達CD16/32，低劑量含藥血清可以最大限度抑制M2型Mφ及泡沫細胞表達CD16/32，降低它們的抑炎作用。
　　結論:
　　(1)在M

7、φ中，低劑量黃連含藥血清干預組能促進TGF-β及CD206的表達;中劑量含藥血清干預組能抑制TNF-α、CD16/32表達，促進TGF-β、CD206表達。
　　(2)在M1型Mφ中，低劑量黃連含藥血清干預組能抑制TNF-α分泌，促進TGF-β及CD206的表達;中劑量黃連含藥血清干預組能夠促進TNF-α及CD206的表達;高劑量含藥血清干預組可以抑制TGF-β分泌，促進CD206表達。在M2型Mφ中，低劑量黃連含藥血清干預組能抑

8、制TNF-α、CD16/32表達，促進TGF-β分泌;中劑量黃連含藥血清干預組能抑制TNF-α、CD16/32分泌，促進TGF-β分泌;高劑量含藥血清干預組能抑制CD16/32表達，促進TNF-α分泌。
　　(3)在泡沫細胞中，高、中、低劑量含藥血清均能促進TGF-β分泌，抑制CD16/32表達。
　　不同劑量的黃連含藥血清對巨噬細胞和泡沫細胞極化后TNF-α、TGF-β、CD16/32和CD206的表達各有差異，這反應了中