免疫調(diào)節(jié)基因RGS1功能研究.pdf

1、免疫抑制作為機體負性免疫調(diào)節(jié)的主要過程，其誘導對腫瘤免疫，移植排斥反應和自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉歸有著重要的影響。它的發(fā)生涉及到免疫應答過程中任何一個正、負調(diào)節(jié)系統(tǒng)。克隆不應答、免疫活性細胞激活受阻、缺乏輔助細胞和抑制細胞的作用、其他抑制免疫細胞的抑制作用。樹突細胞作為免疫系統(tǒng)最有效的抗原呈現(xiàn)細胞，在免疫反應的啟動和免疫反應的調(diào)節(jié)過程中起著決定性作用。在實驗室前期的工作中發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的人卵巢癌細胞能引導樹突細胞免疫耐受在此基礎上對

2、卵巢癌細胞引導的免疫抑制樹突細胞進行基因芯片分析，發(fā)現(xiàn)RGS1基因表達明顯上調(diào)。因此，我們調(diào)查RGS1基在抗腫瘤免疫抑制方面的作用。 第一部分：鼠RGS1基因功能的鑒定 實驗首先建立了鼠RGS1基因穩(wěn)定轉染的RAW264.7細胞系，然后通過NF-κB-熒光素酶共轉染，流式細胞儀檢測，基因芯片分析及RT-PCR方法從轉錄因素、細胞表面分子的表達及細胞因子的分泌三個方面探討了RGS1基因的功能。結果表明鼠RGS1基因明顯抑制

3、RAW264.7細胞NF-κB轉錄因素的活性，升高細胞表面CD40、CD86、B7-H1和PD1分子的表達，降低CD80表達。同時對細胞因子IL6、IL10、IL12的表達也有明顯的影響，其中IL6的表達升高；IL10、IL12的表達降低。在經(jīng)過不同的Tolllikereceptor配體(LPS、POLYI：C、PGN、BDNA)刺激后，比較鼠RGS1基因穩(wěn)定轉染的RAW264.7細胞與對照細胞系，RGS1基因明顯抑制了各種Tollli

4、kereceptor配體(LPS、POLYI：C、PGN、BDNA)對RAW264.7細胞的活化作用，說明RGS1基因可能對Tolllikereceptor途徑存在的負性調(diào)節(jié)作用。 第二部分：人RGS1基因成功克隆與功能的初步鑒定 實驗通過RT-PCR方法克隆了人RGS1基因，用InvitrogenpcDNA3.1/V5-His(C)TOPO(R)TAExpressionKit將其連接到pcDNA3.1/V5表達載體。然

5、后以連接的質(zhì)粒為基礎通過化學發(fā)光及ELISA方法對人RGS1基因的功能進行了初步的研究。結果顯示RGS1對293T細胞轉錄因素NF-κB的活性有明顯的抑制作用，同時改變樹突細胞細胞因子IL6、IL10、IL12的表達。初步證明了人RGS1基因功能的實驗也同樣存在免疫調(diào)節(jié)功能。 鼠RGS1基因在單核巨噬細胞系中表現(xiàn)出明顯的負性免疫調(diào)節(jié)作用，同時對于不同Tolllikereceptor途徑(TLR2、TLR3、TLR4、TLR9)對