編碼HIV-1 CN54 gp120基因的重組脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的構(gòu)建.pdf

1、目的： 用基因重組技術(shù)，構(gòu)建含有中國(guó)流行株HIV-1 CN54 gp120基因的重組PV載體，為HIV疫苗的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 采用加端PCR的方法，擴(kuò)增出兩端帶有AatⅡ和SnaBⅠ限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的gp120基因片段，經(jīng)雙酶切回收純化后，將這段基因片段與經(jīng)過(guò)雙酶切消化后回收純化的PV載體大片段進(jìn)行連接。將重組子轉(zhuǎn)化E.coli感受態(tài)細(xì)胞，提取質(zhì)粒，進(jìn)行PCR、酶切鑒定和DNA序列分析。鑒定基因重組正

2、確的表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)大量擴(kuò)增純化后，轉(zhuǎn)染處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)目的基因在mRNA水平上的表達(dá)情況；提取細(xì)胞總蛋白，進(jìn)行Western-Blot分析檢測(cè)目的基因在蛋白水平上的表達(dá)情況。 結(jié)論： 1.首次成功構(gòu)建了包含中國(guó)主要流行株HIV-1 B'/C重組毒株CN54 gp120基因的重組PV缺陷型疫苗表達(dá)載體。 2.完成對(duì)重組PV載體的鑒定，并將其轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，對(duì)目的基因