Adipophilin通過ERK1-2-PPARγ途徑促進細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積.pdf

1、目的: 通過觀察 Ox-LDL孵育 RAW264.7細胞不同時間后 PPARγ和adipophilin表達和ERK1/2活性及細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的變化、觀察ERK1/2抑制劑或PPARγ抑制劑/激動劑預(yù)處理細胞后細胞內(nèi)上述指標的變化、觀察穩(wěn)定高表達adipophilin和沉默adipophilin基因的RAW264.7細胞株細胞內(nèi)上述指標的變化，探討adipophilin是否通過ERK1/2-PPARγ信號途徑促進細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積，闡明ad

2、ipophilin促進泡沫細胞形成的機制。
　　方法: 用50μg/ml Ox-LDL孵育細胞不同時間后，分別用半定量RT-PCR和Western印跡檢測adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表達的變化，以Western印跡檢測ERK1/2及其磷酸化；用ERK1/2抑制劑預(yù)孵育細胞2 h，再與50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后，檢測細胞內(nèi)上述指標的變化；用PPARγ抑制劑或激動劑預(yù)孵育細胞2 h，再與50μg

3、/ml Ox-LDL共孵育24 h后，檢測細胞內(nèi)上述指標的變化；構(gòu)建穩(wěn)定高表達adipophilin和沉默adipophilin的RAW264.7細胞株，檢測這兩種細胞與50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積情況，分別用半定量RT-PCR和Western印跡檢測adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表達的變化，以Western印跡對與動脈粥樣硬化發(fā)病有關(guān)的ERK1/2及其磷酸化進行檢測。
　　結(jié)果

4、: 隨著RAW264.7細胞荷脂時間的延長，胞漿內(nèi)脂滴的數(shù)量、adipophilin和PPARγ的mRNA與蛋白表達明顯增加，磷酸化的ERK1/2也增加；而ERK1/2的抑制劑能減少胞漿內(nèi)的脂滴數(shù)量，adipophilin、PPARγ的mRNA與蛋白表達也下調(diào)，磷酸化的ERK1/2減少；給予PPARγ的激動劑處理后，胞漿內(nèi)脂滴數(shù)量、adipophilin、PPARγ的mRNA與蛋白表達增加，ERK1/2被活化，而用PPARγ的抑制劑處理

5、后，上述指標則呈現(xiàn)相反的變化；在荷脂情況下，穩(wěn)定高表達adipophilin的細胞中脂質(zhì)蓄積明顯增加，PPARγ和磷酸化的ERK1/2下調(diào)，沉默adipophilin的細胞中脂質(zhì)蓄積則減少，而PPARγ和磷酸化ERK1/2反而上調(diào)。
　　結(jié)論: Ox-LDL能活化ERK1/2，抑制ERK1/2的活性能抑制Ox-LDL誘導的adipophilin和PPARγ的表達，并進一步抑制脂質(zhì)蓄積；PPARγ激動劑能增加adipophilin