hsBAFF通過PTEN-AkT-Erk1-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)B細(xì)胞增殖分子機(jī)理研究.pdf

1、本研究運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)、MTS分析、RNA干擾、Western bloting等細(xì)胞學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和方法，以Raji細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究了PTEN活性與Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在hsBAFF誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖和存活中作用;通過上調(diào)PTEN表達(dá)、或抑制/鈍化Akt活性，進(jìn)一步探討了hsBAFF促B細(xì)胞增殖和存活過程中，PTEN/Akt功能活性與Erk1/2通路激活的關(guān)系。本研究旨在為理解BAFF調(diào)控B淋巴瘤與自身免疫性疾病發(fā)生提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。結(jié)果

2、如下:
　　1. hsBAFF促進(jìn)B細(xì)胞增殖和存活關(guān)聯(lián)PTEN抑制和Akt激活
　　Raji細(xì)胞用0-0.25μg/ml hsBAFF處理12h或48 h、或用0.25μg/ml hsBAFF處理0-24h、或在用Akt抑制劑Ⅹ(10μM)預(yù)處理1h后加hsBAFF（0.1和0.25μg/ml）處理12 h或48h;在一些情況下，分別用Ad-PTEN和Ad-GFP感染的Raji細(xì)胞用hsBAFF（0.1和0.25μg/ml）

3、處理12h或48h。然后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTS分析評(píng)估細(xì)胞增殖和存活表現(xiàn)、Western blotting檢測PTEN、Akt及其相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)。結(jié)果顯示:hsBAFF以濃度和時(shí)間依賴方式促進(jìn)Raji細(xì)胞增殖和存活、增加Survivin以及PTEN、Akt、S6K1、4E-BP1、GSK3β磷酸化表達(dá);抑制Akt活性阻滯hsBAFF誘導(dǎo)Bcl-2和Survivin增加以及S6K1、GSK3β磷酸化增加，進(jìn)而削弱細(xì)胞增殖和存活;PTEN

4、過表達(dá)部分地抑制hsBAFF誘導(dǎo)Bcl-2、Survivin升高以及PTEN、Akt、S6K1、4E-BP1、GSK3β磷酸化增加，并因此降低細(xì)胞增殖和存活。提示:hsBAFF抑制PTEN和激活A(yù)kt活性促進(jìn)B細(xì)胞增殖和存活。
　　2. hsBAFF通過激活A(yù)kt-Erk1/2信號(hào)通路促進(jìn)B細(xì)胞增殖和存活
　　Raji細(xì)胞或Ad-dn-Akt、Ad-MKK1-K97M的感染Raji細(xì)胞用Akt抑制劑Ⅹ(10μM)和/或Erk

5、1/2抑制劑PD98059(10μM)預(yù)處理1h后加hsBAFF(0.1和/或0.25μg/ml)處理12h或48 h。然后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTS分析評(píng)估細(xì)胞增殖和存活表現(xiàn)、Western blotting檢測相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)。結(jié)果顯示:hsBAFF可以通過Akt通路調(diào)控Erk1/2活性促進(jìn)Raji細(xì)胞增殖和存活。這被抑制Akt活性削弱hsBAFF誘導(dǎo)的Erk1/2磷酸化和Raji細(xì)胞增殖和存活，以及鈍化Akt部分地阻止hsBAFF誘導(dǎo)

6、Erk1/2磷酸化和Raji細(xì)胞增殖和存活，以及鈍化MKK1抑制Raji細(xì)胞增殖和存活證據(jù)支持。提示:hsBAFF通過激活A(yù)kt-Erk1/2信號(hào)通路促進(jìn)B細(xì)胞增殖和存活。
　　3. hsBAFF通過抑制PTEN激活Erk1/2通路促進(jìn)B細(xì)胞增殖和存活
　　Ad-PTEN和Ad-GFP感染的Raji細(xì)胞用hsBAFF（0.1和0.25μg/ml）處理12h、或用Erk1/2抑制劑PD98059(10μM)預(yù)處理1h后加hsB