三氧化二砷對(duì)黑色素瘤B16細(xì)胞小鼠肺轉(zhuǎn)移的抑制作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：研究三氧化二砷(arsenic trioxide As2O3)對(duì)鼠黑色素瘤B16細(xì)胞C57BL/6J小鼠肺轉(zhuǎn)移的抑制作用，對(duì) B16細(xì)胞的黏附、遷移能力以及細(xì)胞表面黏附分子CD44表達(dá)的影響，旨在進(jìn)一步研究As2O3的抗腫瘤作用及抗轉(zhuǎn)移機(jī)制，為As2O3治療黑色素瘤提供重要的理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：通過(guò)黏附和遷移實(shí)驗(yàn)研究As2O3對(duì)B16細(xì)胞的黏附、遷移能力的影響；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)As2O3對(duì)B16細(xì)胞黏附分子C

2、D44表達(dá)的影響；半定量RT-PCR法和Western-blot法檢測(cè)不同濃度 As2O3作用后 B16細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白的的表達(dá)；體內(nèi)試驗(yàn)中，將 B16細(xì)胞注入 C57BL/6J小鼠尾靜脈，建立肺轉(zhuǎn)移模型。取肺稱重、計(jì)數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移灶；眼球取血，檢測(cè)小鼠血清 ALT、AST、GLU、CREA、UREA、TP、Alb等指標(biāo)，觀察 As2O3有

3、效抑瘤劑量對(duì)小鼠肝、腎及心臟等重要器官是否有毒性作用。
　　結(jié)果：①As2O3能夠抑制B16細(xì)胞的遷移能力，0～20.0μmol/L As2O3各處理組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)；②經(jīng)5.0μmol/LAs2O3處理過(guò)的B16細(xì)胞與基質(zhì)膠(Matrigel）的黏附能力顯著下降，處理組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)③As2O3能降低細(xì)胞表面黏附分子CD44的表達(dá)，5.0、10.0、20.0μmol/L

4、 As2O3的各處理CD44組表達(dá)平均分別(70.22±3.41)％、(53.03±4.14)%、(16.56±2.23)%，與對(duì)照組(99.62±1.99)%比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；④經(jīng)5.0、10.0、20.0μmol/L As2O3作用24h，RT-PCR結(jié)果顯示，B16細(xì)胞VEGF cDNA電泳條帶隨AS2O3濃度的增加而降低，相對(duì)表達(dá)量分別為(60.34±3.1)%、(32.18±4.44)%、(6.99±2.

5、11)%，與對(duì)照組(112.3±5.8)%比較有顯著差異(P<0.01)。Western-blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著As2O3濃度的增加，B16細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)下降，相對(duì)表達(dá)量分別為(45.3±3.45)%、(30.34±2.44)%和(19.27±4.1)%，與對(duì)照組(60.01±3.89)%比較，差異有顯著性(P<0.01)。⑤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，磷酸鹽緩沖液(PBS)組肺重量與肺轉(zhuǎn)移灶形成數(shù)與As2O3高劑量組、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照

6、組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01~P<0.05)。
　　結(jié)論：①As2O3能夠抑制 B16細(xì)胞的黏附和遷移能力。②As2O3能降低B16細(xì)胞表面黏附分子CD44的表達(dá)，在一定濃度范圍內(nèi)，表達(dá)率隨 As2O3濃度增高而降低，呈濃度依賴關(guān)系。③As2O3能降低 B16細(xì)胞 VEGF mRNA及VEGF蛋白的表達(dá)，在一定濃度范圍內(nèi)呈濃度和時(shí)間依賴關(guān)系。④As2O3能降低小鼠肺表面轉(zhuǎn)移灶的形成數(shù)量。⑤有效抑瘤量的As2O3對(duì)小鼠體重