苦參堿通過ERK信號通路對HepG2肝癌細(xì)胞增殖及遷移的影響.pdf

1、目的：觀察苦參堿對肝癌細(xì)胞的抑制效果及機(jī)制。
　　方法：選取HepG2肝癌細(xì)胞系，MTT篩選苦參堿作用于HepG2肝癌細(xì)胞的濃度梯度，并觀察苦參堿對HepG2肝癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、實(shí)驗(yàn)組、陽性對照組3組，空白對照組加入不含藥的細(xì)胞培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組分別加入苦參堿，使其終濃度為1、2、4 mg/mL，陽性對照組加用終濃度為20 umol/L的ERK信號通路阻斷劑PD98059，培養(yǎng)24小時后，MTT檢測細(xì)胞增殖、Tr

2、answell小室檢測細(xì)胞遷移數(shù)目、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測ERK信號通路上的關(guān)鍵蛋白ERK的核酸表達(dá)變化，蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western-Blot）檢測ERK、p-ERK蛋白質(zhì)表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：空白對照組細(xì)胞排列緊密，呈梭形，形態(tài)飽滿，貼壁良好；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)隨著濃度升高細(xì)胞密度逐漸減低，貼壁不牢，并在高濃度時出現(xiàn)壞死的細(xì)胞碎片。
　　2. MTT結(jié)果顯示，苦參堿對Hep

3、G2細(xì)胞增殖的抑制作用具有時間和濃度依賴性。并且在24h時間段內(nèi)1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL濃度時苦參堿對HepG2作用最敏感。
　　3.細(xì)胞遷移能力變化：實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比，1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL組細(xì)胞遷移能力顯著減少（P＜0.01），4 mg/mL與陽性對照組比較無差異（P＞0.05）。
　　4.ERK核酸表達(dá)：經(jīng)苦參堿作用后ERK mRNA的表達(dá)量顯著下降，實(shí)驗(yàn)組中4 mg

4、/mL、2 mg/mL與空白對照組相比有差異（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組與陽性對照組比較核酸表達(dá)量未下降，4mg/mL、2mg/mL有差異（P＜0.05）。
　　5. ERK和p-ERK蛋白的表達(dá)：實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比，p-ERK蛋白表達(dá)量在2 mg/mL、4 mg/mL濃度時下調(diào)顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），ERK蛋白表達(dá)量在2 mg/mL、4 mg/mL濃度時下調(diào)顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；與陽性對照組相比，1 m