流體切應力調(diào)控成骨細胞周期G1-S點機制的實驗研究.pdf

1、目的：探討流體切應力(FSS)促成骨細胞增殖，分化作用以及細胞周期從G1期向S期轉化機制的關系，為確立最佳生理應力刺激骨再生提供依據(jù)。 方法：從KM乳鼠顱蓋骨提取原代成骨細胞，在體外流體小室內(nèi)分別受FSS(12dyn/c㎡)作用0、0.25、0.5，1、2、4小時，通過MTT法分析細胞增殖能力，利用堿性磷酸酶(ALP)的表達評價其分化性能；通過流式細胞儀、免疫熒光染色和RT-PCR測定細胞周期G1/S百分比、細胞周期依賴激酶2和

2、4(CDK2、CDK4)的活性改變及E2F1、p27、SIVA-1mRNA的表達證明FSS促成骨細胞由G1期向S期的轉化。 結果：短期內(nèi)(0.25h、0.5h) FSS促增殖作用明顯，并且細胞生長曲線前移；但在1h、2h、4h卻有明顯抑制增殖作用。FSS同樣增加了ALP的活性，尤其在應力作用0.25h、0.5h時顯著(比對照達128％和158％)；而應力作用1h、2h、4h后減低了ALP的表達。在FSS作用1h內(nèi)細胞周期S期百分

3、比增高，作用0.5h后與對照組比較明顯增高(P<0.05)；但隨著時間的增加細胞周期S期百分比開始下降，當作用時間持續(xù)4h后S期百分比下降明顯(P<0.05)。流體應力增加了活化pRb的CDK2、CDK4的活性，而且與CDK2相關的E2F1表達量也明顯增加；而細胞周期依賴激酶抑制劑p27和細胞凋亡誘導因子SIVA-1在流體應力作用下有所下降。其中流體切應力在0.25h、0.5h明顯增加了E2F1mRNA的表達水平(P<0.05)，作用1