機(jī)械牽張力調(diào)控成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：成骨細(xì)胞凋亡在骨改建中起重要作用，并與機(jī)械性應(yīng)力密切相關(guān)，本研究的目的是觀察不同大小機(jī)械牽張力對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞凋亡的影響，并探討機(jī)械牽張力對成骨細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制及細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的關(guān)系。
　　 材料與方法：運(yùn)用酶消化法分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱頂骨成骨細(xì)胞，取P2-P4代成骨細(xì)胞分別培養(yǎng)2d和4d后更換至無血清培養(yǎng)液，使用Flexcell4000TM細(xì)胞應(yīng)變加載系統(tǒng)施加6％和12％的等軸周期性張應(yīng)變，總加力時間

2、為72hr，對照組細(xì)胞不加力。根據(jù)總培養(yǎng)時間分為5d和7d兩組。運(yùn)用Hoechst33258染色法對成骨細(xì)胞凋亡做定性分析，運(yùn)用Annexin V-FITC/PI雙染色法通過流式細(xì)胞技術(shù)對細(xì)胞凋亡率做定量分析。運(yùn)用Alamar Blue試劑盒對成骨細(xì)胞增殖活性進(jìn)行定量檢測，運(yùn)用pNPP法檢測成骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性。使用Real time PCR對ALP、Ⅰ型膠原(ColⅠ)及骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)做定量分析；并分析Bcl-2

3、和Bax，Caspase3、Caspase8及Caspase9的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①6％的周期性張應(yīng)變使成骨細(xì)胞凋亡率降低而增殖活性升高，以5d組表現(xiàn)更為顯著，其凋亡率為對照組的55％(P<0.05)，增殖活性為對照組的1.34倍(P<0.01)。相反在12％的周期性張應(yīng)變作用下，成骨細(xì)胞凋亡率增加而增殖活性降低，以7d組表現(xiàn)更為顯著，其凋亡率為對照組的2.92倍(P<0.01)，增殖活性僅為對照組的36％(P<0.01)；②

4、6％的張應(yīng)變作用下，5d組成骨細(xì)胞Bcl-2/Bax比值顯著上調(diào)，為對照組的10.8倍(P<0.01)，Caspase8和Caspase3表達(dá)明顯下調(diào)(P<0.01)。12％的張應(yīng)變作用下，7d組成骨細(xì)胞Bcl-2/Bax比值下降了74％(P<0.05)，Caspase8和Caspase3表達(dá)上調(diào)；③在兩種張應(yīng)變作用下，成骨細(xì)胞ALP活性均下降。
　　 結(jié)論：①機(jī)械牽張力影響成骨細(xì)胞凋亡，并與牽張力大小直接相關(guān)；②機(jī)械牽張力通過