氯乙烯對(duì)大鼠肝細(xì)胞周期及G1-S關(guān)卡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察氯乙烯(vinyl chloride monomer, VCM)染毒大鼠肝臟細(xì)胞周期不同時(shí)相的分布及細(xì)胞周期G1/S關(guān)卡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的變化，從周期調(diào)控的角度，探討VCM可能的致癌機(jī)制。
　　 方法:
　　 選用健康清潔級(jí)SD大鼠64只，按體重隨機(jī)分為4組:陰性對(duì)照組，5、25、125mg/kg VCM染毒組。隔日腹腔注射染毒，連續(xù)12周。分別在染毒6周、12周處死動(dòng)物。用流式細(xì)胞儀(FC

2、M)分析肝臟細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率的情況;肝臟組織HE染色觀察組織形態(tài)變化;實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定細(xì)胞周期G1/S關(guān)卡的正性調(diào)控相關(guān)基因細(xì)胞周期蛋白A2(cyclinA2/CCNA2)、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1/CCND1)、細(xì)胞周期蛋白E1(cyclinE1/CCNE1)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2(CDK2)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和負(fù)性調(diào)控相關(guān)基因p53(TP53)、p21(CDKN1A)、p16(CD

3、KN2A) mRNA的表達(dá)以及miR-122a的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 細(xì)胞周期分布結(jié)果顯示，染毒6周，5、25mg/kg VCM染毒組大鼠肝臟細(xì)胞G0/G1期分布百分比分別為(69.73±10.94)和(74.32±9.29)，均高于對(duì)照組(56.13±10.65)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);25mg/kgVCM染毒組S期分布百分比(1.80±2.11)低于對(duì)照組(12.82±5.85)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(P＜0.05）。染毒12周，各染毒組大鼠肝臟細(xì)胞G0/G1期分布百分比與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);125 mg/kg VCM染毒組肝細(xì)胞S期分布百分比(14.91±4.43)高于對(duì)照組(6.68±2.64)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　 細(xì)胞凋亡率顯示，6周和12周大鼠肝細(xì)胞凋亡率隨著染毒劑量的增加而升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 肝臟組織HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組和5

5、mg/kg VCM染毒組未見肝細(xì)胞變性或壞死;25mg/kg VCM染毒組觀察到肝細(xì)胞變性，包括脂肪樣變、空泡變性等;125mg/kg VCM染毒組肝細(xì)胞變性加重，觀察到脂肪樣變、空泡變性、氣球樣變等，匯管區(qū)變大，纖維化及細(xì)胞核腫脹等病理改變。
　　 染毒6周，VCM染毒組肝臟細(xì)胞CCND1、CDK4和CDK2基因mRNA的表達(dá)均低于對(duì)照組，且125mg/kg VCM染毒組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。肝臟細(xì)胞

6、TP53、CDKN1A、CDKN2A、CCNA2和CCNE1基因mRNA的表達(dá)沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 染毒12周，肝臟細(xì)胞CDKN1A基因mRNA表達(dá)隨著染毒劑量的增加有升高的趨勢(shì)，125mg/kg VCM染毒組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肝臟細(xì)胞TP53、CDKN2A、CCNA2、CCND1、CCNE1、CDK2和CDK4基因mRNA的表達(dá)沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P＞0.05）。
　　 染毒12周，外周血淋巴細(xì)胞G1/S關(guān)卡相關(guān)基因TP53、CDKN1A、CDKN2A、CCNA2、CCND1、CCNE1、CDK2和CDK4基因mRNA的表達(dá)均沒有明顯的改變，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 染毒12周，肝臟細(xì)胞miR-122a的表達(dá)水平隨著染毒劑量的增加有降低的趨勢(shì)，但各染毒組與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.肝臟

8、是VCM毒作用的靶器官之一。肝臟細(xì)胞出現(xiàn)變性，匯管區(qū)變大，纖維化及細(xì)胞核腫脹等病理改變。
　　 2.VCM誘導(dǎo)大鼠肝臟細(xì)胞周期阻滯，早期阻滯于G0/G1期，晚期阻滯于S期。
　　 3.VCM可能影響大鼠肝臟細(xì)胞G1/S關(guān)卡功能。
　　 4.在本實(shí)驗(yàn)條件下，VCM對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞凋亡率無影響。
　　 5.VCM對(duì)G1期的阻滯主要是通過下調(diào)CCND1、CDK4以及CDK2基因的表達(dá)。
　　 6.VCM對(duì)