低氧-HIF-1a通路對(duì)成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞間耦聯(lián)的調(diào)控作用.pdf

1、破骨細(xì)胞是骨重建的重要細(xì)胞，骨重建可骨骼每十年得到一次全面的更新。破骨細(xì)胞來(lái)源于骨髓單核巨噬細(xì)胞系，在體內(nèi)主要受骨髓基質(zhì)細(xì)胞或成骨細(xì)胞分泌的（receptor activator of nuclear factor-kB ligand，RANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（macrophagecolony stimulating factor M-CSF）兩種分子調(diào)控。本試驗(yàn)通過(guò)間接接觸的方式建立成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型探討成骨細(xì)胞對(duì)

2、破骨細(xì)胞的影響。
　　 目的：建立HIF-1和VHL基因成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型，為探討低氧/HIF-1通路對(duì)成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞間耦聯(lián)的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：取3-4天的不同基因型小鼠顱蓋骨胞和4-8周齡小鼠四肢長(zhǎng)骨，分別分離培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，采用間接接觸的方式將接種了破骨細(xì)胞的共培養(yǎng)皿或骨片置于提前24小時(shí)接種了成骨細(xì)胞的六孔板中共培養(yǎng)，real-time的方法檢測(cè)成骨細(xì)胞rankl和opgRT-P

3、CR的方法檢測(cè)破骨細(xì)胞的標(biāo)志基因TRAP的表達(dá)情況，以及破骨細(xì)胞骨形成的骨陷窩。
　　 結(jié)果：rankl的量，vhl各組隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量依次減少。Opg的量，骨吸收陷窩9天開(kāi)始出現(xiàn)，隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，陷窩數(shù)量和面積逐漸增多，HIF-1-/-陷窩數(shù)量和面積明顯較其他實(shí)驗(yàn)組多，而HIF-1-/-vhl-/-陷窩數(shù)量和面積最少。破骨細(xì)胞的標(biāo)志基因TRAP在5天組開(kāi)始表達(dá)。
　　 結(jié)論：低氧/HIF-1通路激活后，