荷葉生物堿對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞PPARγ及CD36表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]：
　　1.觀察ox-LDL對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化的影響及其機(jī)制。
　　2.觀察荷葉生物堿對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化的影響。
　　3.探討荷葉生物堿對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞PPARγ及CD36表達(dá)的影響。
　　[方法]：
　　THP-1細(xì)胞經(jīng)80nmol/L的佛波酯(PMA)誘導(dǎo)24h后，使其分化為巨噬細(xì)胞。THP-1細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞后，隨機(jī)分為四組:空白對(duì)照組（10％胎牛血清培養(yǎng)基）

2、、ox-LDL組（含50mg/L ox-LDL的10％胎牛血清培養(yǎng)基）、荷葉生物堿組（含50mg/L荷葉生物堿及50mg/L ox-LDL的10％胎牛血清培養(yǎng)基）、ciglitazone組（含50μmol/L ciglitazone、50mg/L荷葉生物堿及50mg/L ox-LDL的10％胎牛血清培養(yǎng)基），除培養(yǎng)基成分不同外，其余培養(yǎng)條件一樣。在37℃、5％ CO2的條件下培養(yǎng)24小時(shí)后，采用油紅O染色法檢測(cè)THP-1源性巨噬細(xì)胞內(nèi)脂

3、質(zhì)蓄積的程度，用Western Blot和R-T PCR技術(shù)檢測(cè)PPARγ及CD36的蛋白和mRNA的表達(dá)水平。
　　[結(jié)果]：
　　1.在顯微鏡下觀察THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化前后細(xì)胞形態(tài)的改變:THP-1細(xì)胞由懸浮生長(zhǎng)、形狀規(guī)則圓形變成貼壁生長(zhǎng)、形狀不規(guī)則梭形，并伸出偽足，分化為巨噬細(xì)胞。
　　2.經(jīng)油紅O染色觀察THP-1源性巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況:ox-LDL組與空白對(duì)照組相比，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積明顯增多，脂質(zhì)

4、顆粒體積變大，數(shù)量變多;荷葉生物堿組與ox-LDL組相比，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積明顯減少，脂質(zhì)顆粒體積變小，數(shù)量變少;ciglitazone組與荷葉生物堿組比較，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況無(wú)明顯變化。
　　3.經(jīng)ox-LDL干預(yù)后，CD36和PPARγ表達(dá)的差異
　　RT-PCR結(jié)果示:ox-LDL組CD36的mRNA相對(duì)表達(dá)量(4.06±0.46)較空白對(duì)照組(1±0)明顯增加(P＜0.01)，ox-LDL組PPARγ的mRNA相對(duì)表達(dá)量

5、(2.13±0.16)較空白對(duì)照組(1±0)明顯增加(P＜0.01)。Western Blot結(jié)果示:ox-LDL組CD36的蛋白表達(dá)量(0.73±0.06)較空白對(duì)照組(0.30±0.03)明顯增加(P＜0.01)，ox-LDL組PPARγ的蛋白表達(dá)量(1.10±0.05)較空白對(duì)照組(0.45±0.02)明顯增加(P＜0.01)。
　　4.經(jīng)荷葉生物堿干預(yù)后，CD36和PPARγ表達(dá)的差異
　　RT-PCR結(jié)果示:荷葉生

6、物堿組CD36的mRNA相對(duì)表達(dá)量(0.40±0.05)較ox-LDL組(1±0)比較明顯減少(P＜0.01)，荷葉生物堿組PPARγ的mRNA相對(duì)表達(dá)量(0.50±0.03)較ox-LDL組(1±0)比較明顯減少(P＜0.01)。Western Blot結(jié)果示:荷葉生物堿組CD36的蛋白表達(dá)量(0.53±0.04)較ox-LDL組(0.73±0.06)明顯減少(P＜0.01)，荷葉生物堿組PPARγ的蛋白表達(dá)量(0.70±0.02)較

7、ox-LDL組(1.10±0.05)明顯減少(P＜0.01)。
　　5.經(jīng)ciglitazone干預(yù)后，CD36和PPARγ表達(dá)的差異
　　RT-PCR結(jié)果示:ciglitazone組CD36的mRNA相對(duì)表達(dá)量(2.11±0.04)較荷葉生物堿組(1±0)比較明顯增多(P＜0.01)，ciglitazone組PPARγ的mRNA相對(duì)表達(dá)量(3.04±0.10)較荷葉生物堿組(1±0)比較明顯增多(P＜0.01)。Weste

8、rn Blot結(jié)果示:ciglitazone組CD36的蛋白表達(dá)量(0.78±0.08)較荷葉生物堿組(0.53±0.04)明顯增多(P＜0.01)，ciglitazone組PPARγ的蛋白表達(dá)量(1.25±0.07)較荷葉生物堿組(0.70±0.02)明顯增多(P＜0.01)。
　　[結(jié)論]：
　　1.ox-LDL促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞的泡沫化，其機(jī)制是通過(guò)激活PPARγ的表達(dá)來(lái)上調(diào)CD36。
　　2.荷葉生物堿