LDL、oxLDL對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞PCSK9、LDLR表達(dá)的影響研究.pdf

1、目的：探討LDL、oxLDL處理THP-1源性巨噬細(xì)胞后LDLR和PCSK9表達(dá)的變化，研究LDL、oxLDL對(duì)PCSK9、LDLR的不同影響，探討THP-1源性巨噬細(xì)胞中PCSK9、LDLR之間的關(guān)系。 方法：THP-1細(xì)胞與160nmol/L的佛波酯孵育24h，誘導(dǎo)成貼壁的巨噬細(xì)胞后，用0μg/ ml、10μg/ml、20μg/ ml、30μg/ ml的LDL處理THP-1巨噬細(xì)胞，油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞荷脂情況，免疫熒光檢測(cè)T

2、HP-1細(xì)胞上PCSK9蛋白表達(dá)及分布情況，RT-PCR、Western blot檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)。用0μg/ ml、10μg/ ml、20μg/ ml、30μg/ ml的oxLDL 處理THP-1巨噬細(xì)胞，油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞荷脂情況，RT-PCR、Western blot分別檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)果:0μg/ ml、10μg

3、/ml、20μg/ ml、30μg/ ml的LDL處理THP-1巨噬細(xì)胞后，油紅O染色發(fā)現(xiàn)，隨著LDL濃度的增大，細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)目增多，呈散在分布，免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)PCSK9在THP-1源性巨噬細(xì)胞上有較強(qiáng)的表達(dá)，并且隨著LDL濃度的增加而增多，RT-PCR、Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，LDL可以下調(diào)THP-1源性巨噬細(xì)胞中LDLR的表達(dá)，呈濃度依賴性，而同時(shí)PCSK9的表達(dá)上調(diào)，也呈濃度依賴性；用0μg/ ml、10μg/ml、2

4、0μg/ ml、30μg/ ml的oxLDL 處理THP-1源性巨噬細(xì)胞，油紅O染色發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞里面出現(xiàn)可見脂滴，而且隨著oxLDL濃度的增大，脂滴顆粒逐漸增大、增多，聚集成團(tuán)。在本實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，oxLDL處理對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)影響均不明顯。 結(jié)論：THP-1源性巨噬細(xì)胞上，同時(shí)有PCSK9和LDLR的表達(dá)； oxLDL對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞LDLR表達(dá)沒(méi)有影響，在本實(shí)驗(yàn)研究的濃