2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、背景: 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種常見(jiàn)的自身免疫性關(guān)節(jié)炎癥疾病,其主要的病理改變是巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),滑膜成纖維細(xì)胞增殖,關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因目前尚不清楚。目前認(rèn)為宿主的遺傳易感性以及由此引起的持久的免疫反應(yīng)是其主要的發(fā)病原因。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎可以影響全身任何覆蓋有軟骨和滑膜的骨關(guān)節(jié)。單核/巨噬細(xì)胞在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過(guò)程中起著重要的作用。單核/巨噬細(xì)胞不僅僅能夠產(chǎn)生很多前炎癥細(xì)胞因子和化學(xué)因子,而且它可通過(guò)很多機(jī)制引起類(lèi)風(fēng)

2、濕關(guān)節(jié)炎的軟骨和骨的損傷。 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎屬祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“痹病”范疇。痹病是由于風(fēng)、寒、熱、濕等因素引起的以疼痛,關(guān)節(jié)、肌腱、肌肉僵直為主要表現(xiàn)的臨床病癥。感受的外因的不同決定了臨床證候特點(diǎn)和藥物的治療?!帮L(fēng)氣盛者為行痹”,行痹以關(guān)節(jié)疼痛游走不定,關(guān)節(jié)活動(dòng)受限,發(fā)熱惡風(fēng),舌質(zhì)淡苔薄白,脈浮為主要特點(diǎn)?!昂畾馐⒄邽橥幢浴?,痛痹以疼痛劇烈,痛處固定,遇寒加重,得溫痛減,舌質(zhì)淡苔白脈弦緊為主要特點(diǎn)。“濕氣盛者為著痹”,著痹以關(guān)節(jié)肌肉疼痛

3、腫脹、重著,舌質(zhì)白苔厚膩脈濡緩為主要特點(diǎn)。熱痹可由上述三種證型發(fā)展而來(lái),熱痹以關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛,遇熱加重,得溫痛減,兼見(jiàn)發(fā)熱、口渴,舌質(zhì)紅,苔干黃,脈滑數(shù)為主要特點(diǎn)。 中藥青風(fēng)藤治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎已經(jīng)有兩千年的歷史。青藤堿是青風(fēng)藤的生物堿單體提取物。過(guò)去的研究表明,青藤堿有廣泛的藥理學(xué)效應(yīng),包括:抗炎、抗風(fēng)濕、免疫抑制、鎮(zhèn)痛和抗心律失常等。青藤堿通過(guò)抑制單核/巨噬細(xì)胞分泌的炎癥介質(zhì)如前列腺素E2,白細(xì)胞三烯和—氧化氮等達(dá)到抗炎的

4、作用。并且,青藤堿可以有效抑制體外淋巴細(xì)胞的增殖,改善大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎和抗炎誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。臨床研究已經(jīng)表明青藤堿對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的治療效果確切。盡管青藤堿有著廣泛的生物學(xué)活性,但是對(duì)其免疫抑制的機(jī)制研究十分有限。本文就青藤堿對(duì)人單核/巨噬細(xì)胞株——THP-1細(xì)胞的增殖、凋亡和細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響做了深入的探討。 目的: 1.探討青藤堿對(duì)人單核/巨噬細(xì)胞株——THP-1細(xì)胞增殖、凋亡的影響; 2.探討青藤堿對(duì)人單

5、核/巨噬細(xì)胞株——THP-1細(xì)胞中細(xì)胞因子IL-1,IL-6基因表達(dá)的影響; 3.闡明青藤堿免疫抑制的機(jī)理及其治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用靶點(diǎn)。 方法: 1.培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,經(jīng)脂多糖刺激后采用青藤堿干預(yù); 2.實(shí)驗(yàn)分四組:青藤堿高劑量組、青藤堿中劑量組、青藤堿低劑量組、空白對(duì)照組,培養(yǎng)液中青藤堿的終濃度分別為:0.3mmol/L、0.15mmol/L、0.075mmol/L; 3.應(yīng)用四唑鹽比色法分

6、析青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞增殖的影響; 4.采用碘化丙啶染色流式細(xì)胞檢測(cè)青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞凋亡的影響; 5.采用吖啶橙/溴已錠染色熒光顯微鏡觀察青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞凋亡的影響; 6.半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞IL-1,IL-6基因表達(dá)的影響; 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,結(jié)果以X±S表示,多組間均數(shù)比較采用Oneway-ANOVA,組間兩兩比較采

7、用LSD檢驗(yàn),P<0.05為顯著性差異。 結(jié)果: 1.青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞增殖影響的測(cè)定 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率檢測(cè)結(jié)果提示,與對(duì)照組相比,高(P<0.01)、中(P<0.01)、低(P<0.05)劑量組OD值均有所減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與低劑量組相比,高劑量組OD值降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而中劑量組OD值降低無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明SIN可有效抑制THP-1細(xì)胞的增殖,抑制其增殖的效

8、果與濃度呈依賴性。 2.青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞凋亡的影響 流式細(xì)胞儀檢測(cè)青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞凋亡結(jié)果提示,與對(duì)照組相比,高(P<0.01)、中(P<0.01)、低(P<0.05)劑量組凋亡率均有所增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與低劑量組相比,高劑量組凋亡率增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而中劑量組凋亡率降低無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明青藤堿可有效增加THP-1細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)其凋亡的效果與濃度呈依賴性。

9、3.吖啶橙/溴已錠熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率 鏡下觀察可見(jiàn)空白對(duì)照組細(xì)胞幾乎所有細(xì)胞形態(tài)正常,核染色質(zhì)著綠色;SIN低劑量組細(xì)胞可見(jiàn)少數(shù)細(xì)胞核著綠色呈固縮狀,并有少數(shù)細(xì)胞膜不完整,EB透過(guò)后呈橘紅色;SIN中劑量組可見(jiàn)胞膜損傷后被EB染色呈橘紅色的細(xì)胞增多,并可見(jiàn)個(gè)別死亡細(xì)胞;SIN高劑量組可見(jiàn)較多細(xì)胞核染色質(zhì)呈橘紅色,并且死亡細(xì)胞增多。凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示,空白對(duì)照組及SIN高、中、低劑量組細(xì)胞凋亡率分別為:1%、17.5%、9%、

10、3.5%。 4.青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞的IL-1基因表達(dá)的影響 IL-1基因及β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳,在預(yù)期位置出現(xiàn)相應(yīng)條帶。IL-1/β-actinPCR擴(kuò)增產(chǎn)物的比值結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,青藤堿高(P<0.01)、中(P<0.01)、低(P<0.01)劑量組IL-1基因表達(dá)均有所減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與低劑量組相比,青藤堿高(P<0.01)、中(P<0.05)劑量組IL-1基因表達(dá)均有所降

11、低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明SIN可有效抑制THP-1細(xì)胞的IL-1基因表達(dá)增殖,抑制IL-1基因表達(dá)的效果與濃度呈依賴性。 5.青藤堿對(duì)THP-1細(xì)胞的IL-6基因表達(dá)的影響 IL-6基因及β-actin擴(kuò)增片段經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳,在預(yù)期位置出現(xiàn)相應(yīng)條帶。IL-6/β-actinPCR擴(kuò)增產(chǎn)物的比值結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,青藤堿高(P<0.01)、中(P<0.01)、低(P>0.05)劑量組IL-6基因表達(dá)均有所降

12、低,高、中劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與低劑量組相比,青藤堿高(P<0.01)、中(P<0.01)劑量組IL-6基因表達(dá)均有所降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明SIN可有效抑制THP-1細(xì)胞的IL-6基因表達(dá),抑制IL-6基因表達(dá)的效果與濃度呈依賴性。 結(jié)論 1.青藤堿可以抑制THP-1細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡; 2.青藤堿可以抑制THP-1細(xì)胞IL-1、IL-6基因表達(dá); 3.青藤堿免疫抑制以及治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作

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