豬帶絳蟲(chóng)熱休克蛋白90α基因的克隆表達(dá)及免疫學(xué)功能的初步研究.pdf

1、目的：生物信息學(xué)分析和預(yù)測(cè)豬帶絳蟲(chóng)熱休克蛋白90α(Taenia solnium Heat shock protein90 alpha）基因及其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和特性，原核克隆表達(dá)豬帶絳蟲(chóng)熱休克蛋白90α基因(Ts HSP90α),對(duì)重組Ts HSP90α其免疫學(xué)功能進(jìn)行初步研究。
　　方法：利用美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)（E

2、xPASY，http://ca.expasy.org/）中有關(guān)基因和蛋白的序列和結(jié)構(gòu)信息分析的各種工具，結(jié)合其它生物信息學(xué)分析軟件包，如 Vector NTI suite,從豬帶絳蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)中識(shí)別Ts HSP90α基因及其編碼區(qū)，分析、預(yù)測(cè)該基因編碼蛋白質(zhì)的理化特性、翻譯后的修飾位點(diǎn)、功能域、亞細(xì)胞定位、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三維空間構(gòu)象等。將豬帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)HSP90α克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)中,在大腸埃希菌BL2

3、1/DE3中用 IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行鑒定,用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進(jìn)行純化,純化的重組蛋白用蛋白印跡(Western Blotting)進(jìn)行免疫學(xué)分析。
　　結(jié)果：該基因全長(zhǎng)1079bp,編碼區(qū)為176bp－1054bp，編碼292個(gè)氨基酸，為全長(zhǎng)基因；BLASTX發(fā)現(xiàn)該基因是熱休克蛋白90α的同源基因； PCR、雙酶切及DNA測(cè)序結(jié)果均表明pET-28a(+

4、)-Ts HSP90α重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果表明目的基因在大腸埃希菌 BL21/DE3中獲得高效表達(dá),經(jīng)親和層析獲得了高純度蛋白。重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識(shí)別,表明其具有免疫原性；同時(shí)，重組蛋白能被豬帶絳蟲(chóng)患者，亞洲帶絳蟲(chóng)患者及牛帶絳蟲(chóng)患者血清識(shí)別，表明重組蛋白具有免疫反應(yīng)性。
　　結(jié)論：應(yīng)用生物信息方法從豬帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng) cDNA文庫(kù)中篩選出了HSP90α基因，并對(duì)其所編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行預(yù)測(cè)。豬帶絳蟲(chóng)成