黃芩苷對(duì)小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬組織Nrf2、IL-10表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分黃芩苷對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)后小鼠海馬組織Nrf2蛋白表達(dá)的影響
　　目的：研究黃芩苷（Baicalin，BCL）對(duì)通過(guò)側(cè)腦室注入海人酸(kainic acid，KA)建立癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus，SE)模型的小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞中Nrf2蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：將45只體重在22-28g的ICR雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照（Sham）組、癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）組、黃芩苷治療（BCL）組3個(gè)組，每組15只。采

2、用在立體定位儀上向側(cè)腦室內(nèi)注入海人酸0.1μg（0.1μg/5μl）的方法建立小鼠SE模型。模型制作成功后，對(duì)BCL組的癲癇小鼠以100mg/kg的劑量腹腔注射黃芩苷1次，12h后以相同劑量重復(fù)注射黃芩苷1次，SE組和Sham組與BCL組同一時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等量的生理鹽水。于制模24h后，各組取5只小鼠腦組織行石蠟包埋切片，行HE染色觀(guān)察海馬組織的形態(tài)學(xué)改變，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)核因子相關(guān)因子2（Nrf2）陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況；各組另外10只

3、小鼠取海馬組織，通過(guò)Western blot檢測(cè)Nrf2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　①HE染色可見(jiàn)Sham組海馬CA3區(qū)細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)均正常；SE組細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)均發(fā)生紊亂，細(xì)胞核固縮、核仁變小甚至消失，胞漿體積變大，有些呈透明化；BCL組可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)介于Sham組和SE組之間。
　?、诿庖呓M織化學(xué)結(jié)果顯示Sham組海馬CA3區(qū)僅有少量散亂分布的淺黃色Nrf2陽(yáng)性細(xì)胞，而SE組則可見(jiàn)大量排列紊亂、架構(gòu)異常的棕黃

4、色Nrf2陽(yáng)性細(xì)胞（P<0.05）。與SE組比較，BCL組中Nrf2陽(yáng)性細(xì)胞呈棕褐色，排列更密集，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　?、踂estern blot結(jié)果顯示，Sham組海馬組織Nrf2蛋白僅有少量表達(dá)，癲癇發(fā)作后的SE組中海馬組織Nrf2蛋白量顯著增加(P<0.05)。與SE組比較，BCL組海馬組織中Nrf2蛋白的表達(dá)量有較明顯的上調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：黃芩苷治療能夠減輕小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海

5、馬組織細(xì)胞的損傷。小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬組織中Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)，可能是海馬組織抵抗氧化損傷的一種自我保護(hù)機(jī)制，而黃芩苷可能通過(guò)增加海馬組織中Nrf2蛋白的表達(dá)，從而增強(qiáng)這種海馬的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　第二部分黃芩苷對(duì)小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬組織IL-10表達(dá)的影響
　　目的：探討海人酸(kainic acid，KA)誘導(dǎo)小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus，SE)后，黃芩苷（Baicalin，BCL）對(duì)其海

6、馬神經(jīng)細(xì)胞的IL-10表達(dá)的影響。
　　方法：將22-28g ICR雄性小鼠45只隨機(jī)分為 Sham組、SE組、BCL組（100mg/kg）共3個(gè)組，每組15只。采取向側(cè)腦室注入海人酸0.1μg（0.1μg/5μl）的方法建立小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型（同第一部分）。制模成功后立即向BCL組小鼠腹腔注射黃芩苷（100mg/kg），12h后再以相同的劑量腹腔注射黃芩苷一次。Sham組及SE組予腹腔注射等量生理鹽水。48h后，各組取5只小鼠

7、腦組織行石蠟包埋切片，行HE染色觀(guān)察海馬組織的形態(tài)學(xué)改變，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)白細(xì)胞介素-10（IL-10）陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況。各組剩余10只小鼠取海馬組織，通過(guò)Western blot檢測(cè)IL-10蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　①模型制作成功48h后，HE染色圖片上可見(jiàn)Sham組海馬CA3區(qū)細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞形態(tài)未見(jiàn)異常；SE組錐體細(xì)胞排列散亂，大部分細(xì)胞破碎，只剩個(gè)別完整細(xì)胞，且形態(tài)異常，有的神經(jīng)細(xì)胞腫脹、胞漿分布不均、

8、核固縮、核仁消失等；BCL組海馬CA3區(qū)只見(jiàn)散在少量的凋亡壞死細(xì)胞。
　　②模型制作成功48h后，免疫組織化學(xué)顯示Sham組海馬區(qū)僅有少量的散在淡黃色I(xiàn)L-10陽(yáng)性細(xì)胞，而SE組則可見(jiàn)分布較多、染色為棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞。與SE組相比，BCL組海馬組織中陽(yáng)性細(xì)胞排列較密集，且細(xì)胞染色較深，為棕褐色，二者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　?、踂estern blot檢測(cè)顯示，Sham組海馬組織中的IL-10蛋白只少量表達(dá)，