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文檔簡介
1、近年來由于生活水平不斷提高,人們運(yùn)動時間不足等因素,使非酒精性脂肪肝的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,但其明確的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。脂質(zhì)代謝在NAFLD的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用,有研究發(fā)現(xiàn),肝臟脂質(zhì)蓄積引發(fā)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的利用與清除發(fā)生失衡,最終導(dǎo)致了肝臟的受損。核因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)與機(jī)體防御系統(tǒng)密切相關(guān),在肝臟的功能穩(wěn)定中起重要作用。因此,研究Nrf2與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在NAFLD中的表達(dá),及Nrf2對脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)
2、的影響,有助于我們深入探討脂質(zhì)代謝紊亂與NAFLD的關(guān)系,從分子角度更為全面的認(rèn)識NAFLD的發(fā)病機(jī)制。
本研究以野生型和Nrf2基因敲除的ICR鼠為實(shí)驗(yàn)動物,采用本實(shí)驗(yàn)室前期建立的高脂飼喂法復(fù)制非酒精性脂肪肝模型,將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為8組:野生型四周空白對照組(A組)、四周模型組(B組)、八周空白對照組(C組)、八周模型組(D組);Nrf2基因敲除型四周空白對照組(E組)、四周模型組(F組)、八周空白對照組(G組)、八周模
3、型組(H組)。A、E組以普通飼料飼喂四周;C、G組以普通飼料飼喂八周;B、F組以高脂飼料飼喂4周;D、H組以高脂飼料飼喂八周。通過生化指標(biāo)以及病理組織學(xué)變化評價脂質(zhì)代謝的變化,RT-PCR法檢測小鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。從小鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因在NAFLD疾病進(jìn)程中表達(dá)的變化情況及Nrf2對脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因表達(dá)的影響進(jìn)行研究,探討Nrf2、脂質(zhì)代謝相關(guān)基因介導(dǎo)的脂質(zhì)代謝紊亂在NAFLD形成過程中發(fā)揮的作用
4、。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
1.NAFLD模型鼠脂質(zhì)代謝的變化
采用實(shí)驗(yàn)室建立的方法,以高脂飲食誘導(dǎo)小鼠NAFLD模型后,按試驗(yàn)計劃分別于飼喂四周和八周,制作小鼠肝臟病理切片觀察其病理學(xué)變化并檢測小鼠血清中TC、TG、HDL和LDL含量。病理學(xué)結(jié)果顯示,野生四周模型組小鼠肝細(xì)胞腫脹,有少量脂肪滴沉積,八周模型組小鼠肝細(xì)胞體積明顯變大,發(fā)生明顯脂肪變性,包漿內(nèi)充滿大量脂肪空泡。與野生型模型組小鼠相比,Nrf2基
5、因敲除模型組小鼠肝細(xì)胞發(fā)生空泡變性,包漿內(nèi)脂滴沉積數(shù)量明顯增多,肝臟脂肪變性更加明顯,病變更加嚴(yán)重。血清學(xué)結(jié)果顯示經(jīng)高脂飼料飼喂4周后,與對照組相比血清中TC、HDL、LDL含量有所升高,飼喂8周后以上指標(biāo)極顯著升高(P<0.01)。TG在血清中含量極顯著降低(P<0.01)。結(jié)果證明高脂飲食引起脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂。
2.NAFLD模型鼠脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因的變化
RT-PCR法檢測肝臟脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因表達(dá)
6、的變化。結(jié)果顯示,經(jīng)高脂飼料飼喂四周后,與其空白對照組相比,野生型模型組小鼠肝臟中PPARα、PPARγ、PGC-1α的表達(dá)量分別下降了19%、12%和15%,而UCP-2、SREBP-1c、FAS、ACC-1的表達(dá)量則分別升高了221%、209%、92%和103%;飼喂八周后,PPARα、PPARγ、 PGC-1α的表達(dá)量分別降低了28%、25%、和28%,表達(dá)量極顯著下降(P<0.01),而UCP-2、SREBP-1c、FAS、AC
7、C-1的表達(dá)量則分別升高了388%、334%、134%和197%,表達(dá)量極顯著升高(P<0.01)。結(jié)果表明隨高脂飼料誘導(dǎo)時間延長,與空白對照組比較,小鼠肝臟中PPARα、PPARγ、PGC-1αmRNA表達(dá)量逐漸下降,兩UCP-2、SREBP-1c、FAS、ACC-1 mRNA表達(dá)量不斷升高。PGC-1α可作為PPARs的輔助激活因子,而PPARs是與脂質(zhì)平衡密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,其表達(dá)受到抑制時會導(dǎo)致一系列與脂質(zhì)代謝相關(guān)的蛋白質(zhì)和
8、酶基因的轉(zhuǎn)錄水平降低,使脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂;UCP-2 mRNA超表達(dá)會消耗大量ATP,使機(jī)體抗“二次打擊”能力減弱;SREBP-1c表達(dá)增加會促進(jìn)脂肪生成基因的表達(dá),使脂肪酸合成增加并且加速甘油三酯的蓄積;FAS可通過催化脂肪再生使肝臟產(chǎn)生大量游離脂肪酸。FAS的活性和數(shù)量增加會使動物機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的生成與沉積;ACC-1表達(dá)量升高會使肝臟脂肪酸的從頭合成與攝取增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明NAFLD模型中脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂,肝臟功能異常,上述基因表達(dá)異
9、常促進(jìn)了NAFLD的發(fā)生。
3.Nrf2對脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因的調(diào)控
與野生型模型組小鼠相比,隨高脂飼料誘導(dǎo)時間延長,Nrf2基因敲除小鼠的脂質(zhì)代謝相關(guān)基因變化更為顯著,此外野生型小鼠肝臟內(nèi)Nrf2基因隨高脂飼養(yǎng)誘導(dǎo)時間的延長,其表達(dá)量逐漸升高。提示Nrf2可調(diào)控脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因的表達(dá),在NAFLD過程中對肝臟具有保護(hù)作用。
以上研究結(jié)果顯示在NAFLD形成過程中,脂質(zhì)代謝主要相關(guān)基因表達(dá)發(fā)
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