發(fā)育期大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬Sema-3A的表達變化與突觸重建的關(guān)系研究.pdf

1、目的:癲癇作為一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,其反復(fù)發(fā)作或癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus,SE)發(fā)作可導(dǎo)致不同程度的腦損傷。隨著腦損傷的發(fā)生,機體啟動一系列防護及修復(fù)機制,這其中就包括了神經(jīng)發(fā)生和突觸重建的過程。Semaphorins家族是一組控制細胞遷移及軸突生長調(diào)控的系列蛋白,越來越多的證據(jù)表明,Semaphorins家族不僅調(diào)控軸突生長,還控制著神經(jīng)元的遷移,并且通過抑制自發(fā)的或異常的軸突生長來維持已建立的突觸連接,并

2、參與突觸可塑性。本實驗旨在觀察發(fā)育期大鼠腦癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬齒狀回Sema-3A、CA3區(qū)突觸素P38的表達變化,并探討Sema-3A在發(fā)育期大鼠腦癲癇持續(xù)狀態(tài)后突觸重建中的可能作用。
　　 方法:生后7(天)d、14d、21d、28d四個日齡組SD大鼠共240只,每組60只,每個日齡組大鼠隨機分模型組(SE組)和對照組(NS組),腹腔注射戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)建立SE模型,用免疫組化法觀察SE發(fā)作

3、后1d、7d、14d、21d、28d的齒狀回(Dentate gyrus,DG)中Sema-3A及海馬CA3區(qū)P38的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、點燃模型的建立及癲癇持續(xù)狀態(tài)行為觀察:SE組大鼠發(fā)作達3.5級以上,持續(xù)1小時,NS組無驚厥。
　　 2、Sema-3A免疫反應(yīng)產(chǎn)物:Sema-3A在齒狀回的顆粒細胞層(Granule cell laye,GCL)表達最明顯,免疫陽性顆粒在神經(jīng)元的胞質(zhì)和軸突上均可見

4、到,偶見胞核染色。NS組Sema-3A陽性表達隨日齡增加呈減少趨勢,即P7日齡組表達最明顯。SE組海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)Sema-3A免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布特征無明顯變化。各日齡組SE發(fā)作后各時間點Sema-3A陽性表達變化趨勢一致,均表現(xiàn)為在SE后7d、14d海馬齒狀回顆粒細胞層Sema-3A免疫反應(yīng)產(chǎn)物的積分光密度(Integral Optical density,IOD)值較NS組顯著減少(P＜0.05),其中以SE發(fā)作后7d減少最明顯。

5、　　 3.P38免疫反應(yīng)產(chǎn)物:NS組切片的海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)P38免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈板層樣分布,神經(jīng)氈內(nèi)免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈特異性點狀或顆粒狀沉積,多為細顆粒狀沉積,神經(jīng)元胞質(zhì)、膠質(zhì)細胞、血管及白質(zhì)不被染色。在海馬CA3區(qū)苔蘚纖維層內(nèi),深染的顆粒狀免疫反應(yīng)產(chǎn)物較為均勻分布,整體看呈月牙形;在齒狀回內(nèi)分子層內(nèi)帶染色最深,顆粒細胞輪廓邊緣也有點狀反應(yīng)產(chǎn)物沉積。SE組海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)P38免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布特征無明顯變化。定量結(jié)果顯示,各個日齡組在SE發(fā)作后各個時