miRNA對肺癌的調(diào)控和易感性研究.pdf

1、肺癌是常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率和死亡率都居于首位，嚴重影響人類健康和社會經(jīng)濟發(fā)展。尋找有效的作用靶點和可靠的生物標志物，為肺癌的預(yù)防、早期診斷和針對性治療提供依據(jù)，是亟待解決的重大公共衛(wèi)生問題。mircoRNA是一類高度保守的短鏈非編碼RNA，通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA，調(diào)控基因表達，參與細胞生長、分化、周期、凋亡等多個生物學(xué)過程。既往研究表明miRNA與腫瘤關(guān)系密切，在腫瘤發(fā)生過程中起到類似于癌基因或抑癌基因的作用

2、，但是目前尚有大量的miRNA生物學(xué)功能和調(diào)控機制不明確。miRNA SNP與腫瘤易感性的關(guān)系也逐漸引起人們的重視，當SNP發(fā)生在miRNA上時，可能影響miRNA的生物學(xué)功能，進而影響腫瘤的發(fā)病風險。
　　本研究在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上，探討miR-202和miR-1908對肺癌細胞的生物學(xué)功能及靶基因調(diào)控作用，分析miR-202和miR-1908在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用以及分子機制。另外，我們采用病例-對照研究，探究miR-

3、202rs12355840、miR-1908 rs174561、miR-608 rs4919510、miR-548jrs4822739的基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系，并通過細胞實驗分析miR-202rs12355840、miR-1908 rs174561對mir-202和mir-1908表達量的影響。研究結(jié)果為肺癌的預(yù)防、早期診斷及治療提供生物標志物和作用靶點。
　　一、miRNA對肺癌的調(diào)控研究
　　目的探討miR-202

4、和miR-1908對肺癌細胞A549的生物學(xué)功能和靶基因調(diào)控。
　　方法應(yīng)用DIANA-TOOLs及KEGG數(shù)據(jù)庫對miR-202和miR-1908進行生物信息學(xué)分析，探討其可能參與的信號通路和潛在靶基因。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，上調(diào)和下調(diào)A549細胞中miR-202和miR-1908的表達，應(yīng)用MTT和流式細胞技術(shù)分別檢測miR-202和miR-1908對A549細胞增殖、細胞周期和凋亡的影響。應(yīng)用RT-qPCR和Western blo

5、t技術(shù)分別檢測miR-202和miR-1908對其預(yù)測靶基因PIK3CA和PP5的mRNA和蛋白表達水平的調(diào)控。
　　結(jié)果生物信息學(xué)分析顯示，miR-202參與的信號通路主要集中在Non-small celllung cancer等腫瘤相關(guān)通路，并可能通過對PIK3CA的靶向調(diào)控發(fā)揮其作用。miR-1908主要參與MAPK signaling pathway等相關(guān)通路的調(diào)控，PP5為其重要潛在靶基因。生物學(xué)功能研究表明，與陰性對照

6、組相比，上調(diào)miR-202的表達能夠抑制A549細胞增殖，引起細胞周期G1/S期阻滯，對細胞凋亡無明顯影響。上調(diào)的miR-1908的表達可引起細胞G2期阻滯，S期減少，對細胞增殖和凋亡無明顯影響。靶基因研究結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，PIK3CA蛋白的表達量與miR-202呈負相關(guān)，但其mRNA的表達無顯著性改變。與陰性對照組相比，PP5蛋白的表達量與miR-1908呈正相關(guān)，其mRNA的表達也無顯著性改變。結(jié)論miR-202可能通過對

7、PIK3CA的負向調(diào)控影響A549細胞增殖和細胞周期，miR-1908可能通過對PP5的正向調(diào)控影響A549細胞周期。
　　二、miRNA基因多態(tài)性與肺癌易感性研究
　　目的探討miR-202、miR-1908、miR-608、miR-548j基因多態(tài)性對肺癌易感性的影響。
　　方法通過病例-對照研究，收集了223例肺癌病例和224例對照的流行病學(xué)資料和血樣，采用LDR法對miR-202 rs12355840、miR-

8、1908rs174561、miR-608rs4919510、miR-548j rs4822739的基因型分布進行檢測，進一步按病理類型和吸煙情況進行分層分析，探討miRNA SNP對肺癌易感性的影響。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)分析miR-202和-miR-1908基因多態(tài)性對其miRNA表達的影響。
　　結(jié)果人群研究結(jié)果顯示，miR-202 rs12355840、miR-1908rs174561、miR-608rs491