2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(蛋白質(zhì)-谷氨酸-γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶,EC2.3.2.13)是一種能夠催化?;D(zhuǎn)移的酶,它們廣泛分布在各種生物,包括人類、動物、植物和各種微生物體內(nèi)。通過這種?;D(zhuǎn)移反應(yīng)可以使得體外多種蛋白質(zhì)、多肽和各種氨基酸之間產(chǎn)生共價交聯(lián)作用,從而改變各種食物蛋白的功能性質(zhì),因而其在食品工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用前景。
   本文以獲得谷氨酰轉(zhuǎn)胺酶高產(chǎn)菌株為目標(biāo),通過對茂原鏈霉菌紫外誘變來選育高產(chǎn)菌株,并對產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶發(fā)酵培養(yǎng)基

2、和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,初步研究了利用基因工程手段構(gòu)建基因工程菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶。
   將購買的菌株活化后,通過自然選育獲得一株產(chǎn)酶能力為0.66U/ml的原始菌株,并對該菌株孢子進(jìn)行紫外線處理,經(jīng)誘變篩選得到一株相對高產(chǎn)穩(wěn)定的菌株,產(chǎn)酶能力達(dá)到0.88U/ml,比原始菌株提高了33%。
   以篩選得到的高產(chǎn)菌株為出發(fā)菌株,通過單因素和正交試驗(yàn)確定了產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶培養(yǎng)基的最佳碳氮源組成為:淀粉25g/L,葡萄糖20

3、g/L,蛋白胨15g/L,黃豆餅粉30g/L,最佳培養(yǎng)條件為:以48h種齡的液體種子按8%的量接種,初始pH為7.0,培養(yǎng)溫度為28℃,搖床轉(zhuǎn)速為200rpm,培養(yǎng)時間為48h。谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶酶活力達(dá)到1.4U/ml。
   以茂原鏈霉菌基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增得到一條長為1224bp的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的基因片段,成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-TGase,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生GST-

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