谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶生產(chǎn)菌種的選育和其基因的表達(dá).pdf

1、谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶（蛋白質(zhì)-谷氨酸-γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶，EC2.3.2.13）是一種能夠催化?；D(zhuǎn)移的酶，它們廣泛分布在各種生物，包括人類、動物、植物和各種微生物體內(nèi)。通過這種?；D(zhuǎn)移反應(yīng)可以使得體外多種蛋白質(zhì)、多肽和各種氨基酸之間產(chǎn)生共價交聯(lián)作用，從而改變各種食物蛋白的功能性質(zhì)，因而其在食品工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本文以獲得谷氨酰轉(zhuǎn)胺酶高產(chǎn)菌株為目標(biāo)，通過對茂原鏈霉菌紫外誘變來選育高產(chǎn)菌株，并對產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶發(fā)酵培養(yǎng)基

2、和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，初步研究了利用基因工程手段構(gòu)建基因工程菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶。
　　 將購買的菌株活化后，通過自然選育獲得一株產(chǎn)酶能力為0.66U/ml的原始菌株，并對該菌株孢子進(jìn)行紫外線處理，經(jīng)誘變篩選得到一株相對高產(chǎn)穩(wěn)定的菌株，產(chǎn)酶能力達(dá)到0.88U/ml，比原始菌株提高了33％。
　　 以篩選得到的高產(chǎn)菌株為出發(fā)菌株，通過單因素和正交試驗(yàn)確定了產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶培養(yǎng)基的最佳碳氮源組成為：淀粉25g/L，葡萄糖20

3、g/L，蛋白胨15g/L，黃豆餅粉30g/L，最佳培養(yǎng)條件為：以48h種齡的液體種子按8%的量接種，初始pH為7.0，培養(yǎng)溫度為28℃，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，培養(yǎng)時間為48h。谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶酶活力達(dá)到1.4U/ml。
　　 以茂原鏈霉菌基因組DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增得到一條長為1224bp的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的基因片段，成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-TGase，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生GST-