車(chē)前子多糖的分離純化及其功能性質(zhì)研究.pdf

1、車(chē)前子具有藥蔬兼用、醫(yī)食同源之性，被我國(guó)衛(wèi)生部列為可用于保健食品的物品。車(chē)前子多糖是車(chē)前子中主要的有效成分，位于種皮外表細(xì)胞壁層。車(chē)前子多糖具有緩瀉、降血糖、降血脂、抗炎及免疫活性等多種生物活性，并作為一種親水性膠體被廣泛用于食品、藥品行業(yè)。歐美等國(guó)對(duì)車(chē)前子多糖的結(jié)構(gòu)、生物活性及其應(yīng)用研究得相當(dāng)深入，而我國(guó)對(duì)其研究甚少。本文以吉安產(chǎn)的大粒車(chē)前子多糖為研究對(duì)象，在系統(tǒng)研究了車(chē)前子多糖的提取、分離純化、初級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，對(duì)其抗氧化活性及功能

2、性質(zhì)進(jìn)行了初步探索?，F(xiàn)將主要研究結(jié)論概括如下： 1．建立了以木糖為標(biāo)準(zhǔn)，采用苯酚-硫酸法進(jìn)行車(chē)前子多糖含量測(cè)定的方法。對(duì)兩種測(cè)定方法和7種的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物分別進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)苯酚-硫酸法更適合測(cè)定車(chē)前子中多糖的含量，以木糖為標(biāo)準(zhǔn)得出的結(jié)果更能準(zhǔn)確反映真實(shí)的多糖含量值。對(duì)苯酚-硫酸法測(cè)定車(chē)前子中多糖含量的測(cè)定條件優(yōu)化為2mL樣液先加3％苯酚溶液0.5mL，混勻后加濃硫酸4mL，迅速搖勻后，室溫放置35min，在480 nm處測(cè)定其

3、吸光度。平均回收率為98.9％，RSD=1.79％(n=6)。此方法是一種測(cè)定車(chē)前子多糖含量的理想方法，也可為其他戊糖含量高的多糖的測(cè)定提供參考。 2．對(duì)車(chē)前子多糖制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究，得出的最佳提取條件為：溫度100℃，料液比 1：35，水浴時(shí)間6 h，提取1次，提取率可達(dá)8.5％。最佳沉淀?xiàng)l件為：乙醇濃度60％，提取液濃縮比為2：1，低溫靜置6 h。該工藝經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)約、可行性強(qiáng)，為車(chē)前子多糖制備的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論參考依據(jù)。

4、 3．比較Sevage法、酶法-Sevage法聯(lián)用脫蛋白的效果，發(fā)現(xiàn)采用酶法-Sevage法聯(lián)用在保留較高蛋白脫除率的同時(shí)，能獲得較高的多糖得率，其組成成份也更為單一。采用Sephacryl-400葡聚糖凝膠層析柱與大分子純化系統(tǒng)AKTA Purifier100聯(lián)用對(duì)車(chē)前子精制多糖進(jìn)行純化，得到一個(gè)多糖組分，經(jīng)HPLC鑒定其為一較純的組分，該組分為糖與蛋白的復(fù)合物，命名為SPG (Semen Plantaginis Glycop

5、rotein)。HPGPC法測(cè)得SPG重均分子量Mw為1898584道爾頓。 4．對(duì)車(chē)前子多糖SPG理化性質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)SPG為棕色粉末，可溶于水，含有2.92％蛋白質(zhì)和14.58％糖醛酸。通過(guò)GC分析，SPG由木糖、阿拉伯糖、半乳糖、核糖、葡萄糖、甘露糖6種單糖組成，木糖、阿拉伯糖是SPG的主要組成單糖。通過(guò)紫外、紅外光譜的特征吸收峰，鑒定SPG為酸性糖蛋白，且結(jié)構(gòu)中存在β-型吡喃糖環(huán)結(jié)構(gòu)。 5．通過(guò)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

6、(DPPH·自由基、O<,2><'->·自由基、·OH自由基和卵黃脂蛋白PUFA 過(guò)氧化體系)，分別研究了車(chē)前子多糖提取物SPWE、車(chē)前子粗多糖CSPP和車(chē)前子多糖純品SPG的抗氧化活性。結(jié)果表明，SPWE、CSPP、SPG均具有一定的抗氧化活性。一定濃度范圍內(nèi)，隨著濃度增加，抗氧化活性逐漸增強(qiáng)。在4種體外抗氧化體系中，SPG的活性較高，在卵黃脂蛋白PUFA過(guò)氧化體系中的作用最顯著，2 mg/mL的作用效果與同濃度的Vc接近。

7、6．通過(guò)流變儀、物性測(cè)定儀、DSC和TGA/SDTA對(duì)車(chē)前子多糖的流變、凝膠特性和熱穩(wěn)定性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，車(chē)前子多糖溶液為假塑性流體，表觀黏度隨濃度的增加逐漸增加；溫度升高可導(dǎo)致溶液黏度降低；在pH5～11時(shí)較穩(wěn)定；對(duì)NaCl具有良好的兼容性，低濃度CaCl<,2>對(duì)車(chē)前子多糖溶液有顯著的增稠效應(yīng)，其增稠效果與離子濃度呈正相關(guān)。車(chē)前子多糖形成的凝膠為熱可逆性凝膠，溶解溫度、濃度、pH、鹽對(duì)凝膠強(qiáng)度具有較大的影響；DSC分析無(wú)明顯的焓