乳酸片球菌素發(fā)酵條件的優(yōu)化及分離純化的研究.pdf

1、細菌素是微生物的代謝產物，有的細菌素已作為食品防腐劑用于提高食品的安全性。本研究的目的是以從國內發(fā)酵食品中分離出的乳酸片球菌PA003(Pediococcus acidilactici PA003)為研究對象，探索提高其片球菌素產率的培養(yǎng)條件，研究片球菌素的分離純化技術。
　　 乳酸片球菌產生的片球菌素對產生菌有吸附作用，Yang等利用該吸附特性建立了分離純化片球菌素的方法。本試驗對乳酸片球菌PA003產生的片球菌素的吸附作用進

2、行了研究，表明片球菌素對產生菌的吸附具有pH依賴性，在pH為6時，片球菌素對產生菌菌體的吸附程度最大，達60％，在pH3以下和pH10以上，對菌體的吸附程度為零。根據(jù)上述現(xiàn)象，建立了在pH6吸附，pH10解吸附的方法，蛋白濃度提高了2.53倍，比活為2.33×105AU/mg。
　　 在搖瓶培養(yǎng)條件下，對培養(yǎng)基組分，包括碳源、氮源、表面活性劑等對乳酸片球菌素產量的影響進行了研究。發(fā)現(xiàn)最適的培養(yǎng)基組成為葡萄糖2.5％、大豆蛋白胨1

3、.5％、蛋白胨1.5％、牛肉膏2％，吐溫801％，磷酸氫二鉀0.2％，乙酸鈉0.5％，檸檬酸銨0.2％，硫酸鎂0.058％，硫酸錳0.025％。采用此培養(yǎng)基，在37℃條件下培養(yǎng)16小時，片球菌素的效價可達到6260.245AU/mL，比常規(guī)MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)效價提高了約9倍。
　　 用常規(guī)MRS培養(yǎng)基，接種乳酸片球菌，37℃條件下培養(yǎng)16小時后，獲取片球菌素解吸附的菌體細胞，細胞經破碎處理后，測定其片球菌素效價大小，發(fā)現(xiàn)胞內片球菌

4、素效價可達到胞外片球菌素效價的30％。
　　 將乳酸片球菌接種至MRS培養(yǎng)基，于5升發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)。發(fā)酵條件為溫度37℃，轉速200 rpm，pH值6.0、6.5、7.0和8.0，發(fā)現(xiàn)最適產片球菌素pH是6.5，最適于菌體生長的pH是7.0，而在pH8.0時片球菌已無生長。通過在菌體生長穩(wěn)定期流加限制性底物葡萄糖，發(fā)現(xiàn)流加低濃度的葡萄糖(3g/h)更適于片球菌素的產生。最高效價是1147.821AU/mL，是未流加葡萄糖情況下