產(chǎn)氨基?；妇甑倪x育及發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、本研究所使用的米曲霉L-09(AspergillusoryzaeL-09)是通過紫外線誘變，經(jīng)紙層析法初篩和亞硝基胍誘變，選育得到的一株氨基?；府a(chǎn)生菌株。紫外誘變后獲得的菌株比出發(fā)菌產(chǎn)酶能力提高了60％，然后用亞硝基胍點試平板法誘變，酶活進一步提高了30.5％。在30℃條件下，培養(yǎng)2d，酶活可達到539.7U/g干曲。 在研究營養(yǎng)條件和培養(yǎng)條件對L-09菌株產(chǎn)酶影響中發(fā)現(xiàn)：碳氮源、促進劑、培養(yǎng)基的料水比對L-09菌株產(chǎn)酶都有影

2、響；發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、接種量、pH對L-09菌株產(chǎn)酶也有影響。最佳營養(yǎng)條件和培養(yǎng)條件為：麩皮、豆餅粉比為8.0∶2.0，麥芽糖5g/L，吐溫-805g/L，植酸0.5g/L，料水比為1∶1，pH7.0，在30℃下，發(fā)酵48h，酶活可達1254.4U/g干曲。 研究鮮曲的浸提條件，實驗結果表明：以1∶10的固液比向鮮曲中加入pH7.0、0.1mol/L磷酸緩沖液，于40℃，在100r/min振蕩條件下，浸提時間2h為佳。

3、 對氨基酰化酶純化研究，采取二次鹽析，先采用30％飽和度的硫酸銨鹽析，除雜蛋白，然后再采用70％飽和度的硫酸銨鹽析，經(jīng)透析除鹽，濃縮，得到酶液。 氨基?；傅拿笇W性質研究：最適pH7.0，最適反應溫度為55℃，最適底物濃度200mmol/L，Co2+對酶活有激活作用，高濃度底物對酶有抑制作用，產(chǎn)物醋酸根對酶有較強的抑制，酶的保存半衰期為104d。37℃游離酶的動力學參數(shù)：Km=30.49(mmol/L)，Vmax=3.94(μm