1-MCP及其與熱結(jié)合處理對采后甜椒果實(shí)衰老過程中差異蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、本研究以‘紅方’甜椒果實(shí)為試驗(yàn)材料，運(yùn)用雙向電泳技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對貯藏期單一1-甲基環(huán)丙烯(1-MCP)和熱與1-MCP結(jié)合(HM)處理甜椒果實(shí)蛋白表達(dá)的差異，通過蛋白功能鑒定與分類并結(jié)合蛋白圖譜生物信息學(xué)分析，深入探討1-MCP及與熱結(jié)合處理對甜椒果實(shí)衰老的調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:
　　1.建立了適合甜椒果實(shí)總蛋白質(zhì)分離的雙向電泳技術(shù)體系。通過酚提取法（提取液pH7.8）提取甜椒果實(shí)總蛋白，等電聚焦66000VH條件下，以

2、17cm pH5～8的IPG膠條上樣1200μg進(jìn)行等電聚焦電泳;SDS-PAGE凝膠濃度為12 g/dL，經(jīng)過考馬斯亮藍(lán)G-250膠體考染后得到效果優(yōu)良的蛋白圖譜。經(jīng)軟件分析，這種雙向電泳條件檢測出的蛋白點(diǎn)個數(shù)約有703±17，分子量在14.4kDa-116.0 kDa之間，并且蛋白點(diǎn)分布均勻，背景清晰且分辨率高，重復(fù)性較好，能滿足后續(xù)質(zhì)譜分析的需要，該優(yōu)化體系的建立為后續(xù)甜椒果實(shí)的總蛋白組學(xué)研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。
　　2.以甜椒

3、果實(shí)‘紅方’為試驗(yàn)材料，采用上述建立的雙向電泳體系對貯藏期單一1-MCP、熱和1-MCP結(jié)合處理甜椒果實(shí)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)差異分析。結(jié)果顯示，相同貯藏環(huán)境和貯藏期的兩種處理甜椒果實(shí)總蛋白表達(dá)情況存在顯著差異。以PDQuest8.0軟件對各處理組的雙向電泳圖譜進(jìn)行分析，獲得500多個蛋白點(diǎn)，其中2倍以上差異表達(dá)的蛋白達(dá)67個，經(jīng)酶解、串聯(lián)質(zhì)譜和數(shù)據(jù)庫檢索均成功得到鑒定。
　　根據(jù)KEGG和PIR功能分類可將差異蛋白分為6類，分別為代謝(

4、64％)、遺傳信息表達(dá)和退化(15％)、環(huán)境信息進(jìn)程(3％)、細(xì)胞進(jìn)程(6％)、脅迫反應(yīng)與防御(12％)和未知功能蛋白(1％);其中代謝相關(guān)的蛋白所占比例最大，其次是脅迫反應(yīng)與防御相關(guān)的蛋白。差異蛋白亞細(xì)胞定位顯示，60個蛋白得到了準(zhǔn)確的亞細(xì)胞定位，主要位于細(xì)胞質(zhì)（22個）、葉綠體（14個）、線粒體（5個）、過氧化物酶體（4個）、細(xì)胞壁（4個）、膜（7個）等。
　　比較單一1-MCP及1-MCP與熱結(jié)合處理間鉗椒果實(shí)蛋白表達(dá)差異，

5、發(fā)現(xiàn)多個差異蛋白與果實(shí)衰老的調(diào)節(jié)相關(guān):參與糖酵解和三羧酸循環(huán)的6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶、2，3-二磷酸變位酶、檸檬酸合酶出現(xiàn)明顯下調(diào)表達(dá)，參與谷胱甘肽抗壞血酸循環(huán)的谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過氧化物酶、錳超氧化物歧化酶、L-抗壞血酸過氧化物酶等出現(xiàn)顯著上調(diào)表達(dá)，參與細(xì)胞生命進(jìn)程的細(xì)胞壁多糖生物合成α-1，4葡聚糖-蛋白質(zhì)合酶及維持細(xì)胞骨架的肌動蛋白-97、α-微管蛋白等也顯著上調(diào)表達(dá)，正調(diào)節(jié)細(xì)胞程序性死亡的metacaspase1貯藏后期出現(xiàn)