干酪乳桿菌LC2W細(xì)胞組分對(duì)巨噬細(xì)胞活性及細(xì)胞因子分泌的影響.pdf

1、免疫調(diào)節(jié)能力作為篩選益生菌的標(biāo)準(zhǔn)和益生菌的重要功能，近些年受到了廣泛的關(guān)注。益生菌免疫方面的研究日趨系統(tǒng)化，內(nèi)容涵蓋免疫學(xué)的各個(gè)部分，研究人員致力于益生菌治療腸道菌群失調(diào)、腫瘤、感染等方面的研究，且取得了一定的成果。益生菌制品也作為保健行業(yè)的一個(gè)新成員有著廣闊的發(fā)展空間。乳桿菌是腸道土著菌群的重要成員之一，能在腸道中定植，能改善或調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力及抑制腫瘤的形成等。
　　 近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為乳酸桿菌免疫

2、調(diào)節(jié)作用與其細(xì)胞壁組分有關(guān)。本文以干酪乳桿菌LC2W為主，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，對(duì)其細(xì)胞裂解物(celllysate)、細(xì)胞壁(cellwall)、細(xì)胞質(zhì)(cytoplasm)以及胞外多糖(EPS)的免疫活性進(jìn)行了研究。
　　 以MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)干酪乳桿菌進(jìn)行增菌培養(yǎng)，收集對(duì)數(shù)期菌體，洗滌菌體并采用高壓均質(zhì)破碎菌體細(xì)胞，獲得細(xì)胞裂解物(celllysate)。將LC2W細(xì)胞裂解物經(jīng)SDS加酶處理，去蛋白、DNA及RNA，獲得純化的

3、細(xì)胞壁(cellwall)。離心收集上清，獲得細(xì)胞質(zhì)(cytoplasm)。
　　 巨噬細(xì)胞作為先天性免疫的重要成員，對(duì)巨噬細(xì)胞的激活與刺激作用是誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答的第一步，只有激活的巨噬細(xì)胞才能發(fā)揮其免疫功能。實(shí)驗(yàn)選擇觀察其受刺激后RAW264.7巨噬細(xì)胞形態(tài)、MTT代謝水平變化，研究其對(duì)巨噬細(xì)胞激活途徑的影響，結(jié)果表明，受刺激后的RAW264.7巨噬細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，在10μg/ml-80μg/ml濃度范圍內(nèi)，對(duì)巨噬細(xì)胞R

4、AW264.7無明顯的損傷作用，并不抑制巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖，不影響細(xì)胞正常的代謝能力與活性。
　　 其次，經(jīng)10-80μg/mL的干酪乳桿菌細(xì)胞裂解物(celllysate)、干酪乳桿菌LC2W細(xì)胞壁(cellwall)和細(xì)胞質(zhì)(cytoplasm)刺激后，巨噬細(xì)胞RAW264.7產(chǎn)生的TNF-α、IFN-γ/、IL-12顯著增加，并呈一定的濃度依賴性。相同濃度下，干酪乳桿菌LC2W、WPC-200、BD-Ⅱ和Shir

5、ota四株菌之間對(duì)細(xì)胞因子的影響差異不明顯；細(xì)胞壁(cellwall)誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌的能力強(qiáng)于細(xì)胞質(zhì)(cytoplasm)。
　　 最后，檢測(cè)了LC2W胞外多糖(EPS)對(duì)脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌功能的影響，發(fā)現(xiàn)不論是EPS和E.coli脂多糖(LPS)同時(shí)加入或是先后間隔24h加入生長(zhǎng)良好的RAW264.7細(xì)胞中，均能抑制由脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞釋放炎癥因子TNF-α，IFN-γ和IL-12，同時(shí)還能夠