干酪乳桿菌LC2W對(duì)胃癌細(xì)胞的黏附作用及對(duì)幽門螺桿菌的拮抗作用.pdf

1、益生菌在胃腸道中的定殖是發(fā)揮其益生作用的前提條件，黏附是益生菌定殖過(guò)程的第一步，同時(shí)黏附的益生菌能夠排斥外來(lái)病原菌的入侵，從而起到抑制致病菌感染的作用。由于菌體表面各種與黏附相關(guān)的成分是介導(dǎo)黏附的基礎(chǔ)，因此，對(duì)這些成分的研究是闡明益生菌黏附機(jī)理的必要條件。黏附機(jī)理的研究對(duì)于消化道微生態(tài)環(huán)境的改善以及病原菌的生態(tài)防治均具有重要意義。本文以干酪乳桿菌 LC2W(Lactobacillus casei LC2W)為對(duì)象，就其黏附性質(zhì)、對(duì)幽門螺

2、桿菌SSl(Helicobacter pylori SSl)體外黏附抑制作用及其參與黏附過(guò)程的表面蛋白成分進(jìn)行了初步的分離和鑒定。 首先，采用形態(tài)學(xué)觀察和顯微計(jì)數(shù)的方法比較了L.casei LC2W的菌液濃度、懸浮介質(zhì)及其pH值對(duì)人胃癌細(xì)胞株MKN-45和HGC-27的黏附情況。結(jié)果表明，L.caseiLC2W對(duì)兩種細(xì)胞均具有黏附性，但對(duì)MKN-45的黏附性更強(qiáng)。這種黏附作用具有菌濃度依賴性，當(dāng)加入的菌懸液濃度達(dá)到一定數(shù)量時(shí)(1

3、0<'9> CFU/mL)，平均每個(gè)細(xì)胞黏附的L.casei LC2W數(shù)量趨于飽和。不同的懸浮介質(zhì)對(duì)L.casei LC2W的黏附性也具有顯著的差異，其中懸浮于耗盡培養(yǎng)上清液(SCS)的L.casei LC2W表現(xiàn)出最強(qiáng)的黏附性。此外，懸浮介質(zhì)的pH值對(duì)L.casei LC2W的黏附性也有影響，pH值4.0時(shí)黏附性最好。將不同懸浮介質(zhì)的pH值調(diào)整到7.0后，SCS仍能很好的促進(jìn)L.caseiLC2W的黏附作用，表明SCS中存在某種促進(jìn)黏

4、附的物質(zhì)。由此推測(cè)，L.casei LC2W對(duì)胃癌細(xì)胞的黏附機(jī)理可能為黏附素與受體的特異性結(jié)合。 其次，為研究L.casei LC2W和H.pylori SSl對(duì)MKN-45細(xì)胞的黏附情況，引入數(shù)學(xué)模型，分別研究了L.casei LC2W與H.pylori SSl的競(jìng)爭(zhēng)、排除和替代作用。結(jié)果表明，L.casei LC2W可以競(jìng)爭(zhēng)H.pylori SSl黏附位點(diǎn)或受體，使后者的黏附值達(dá)不到理論值；L.casei LC2W對(duì)H.py

5、lori SSl的黏附具有很強(qiáng)的排除作用而替代作用不明顯或過(guò)程非常緩慢。細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果表明，L.casei LC2W能降低H.pylori SSl對(duì)MKN-45細(xì)胞的損傷。綜上所述，L.casei LC2W對(duì)胃上皮細(xì)胞保護(hù)作用的強(qiáng)弱與其黏附能力有很大的相關(guān)性，L.casei LC2W可能通過(guò)黏附的競(jìng)爭(zhēng)性占位效應(yīng)，保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性，使宿主細(xì)胞免受損傷。 再次，研究了L.casei LC2W的表面性質(zhì)與黏附作用的關(guān)系。結(jié)果表明

6、，L.caseiLC2W菌體具有疏水性和自聚合能力，黏附能力與疏水性存在很大的相關(guān)性；利用酶，化學(xué)物質(zhì)和熱對(duì)L.casei LC2W的菌體進(jìn)行處理后，其表面疏水性和對(duì)MKN-45細(xì)胞的黏附性均有不同變化。表明L.casei LC2W的黏附作用是多種因素作用的結(jié)果，但蛋白類物質(zhì)起主導(dǎo)作用，表明其黏附素的主要成分為蛋白質(zhì)。 最后，利用5M氯化鋰對(duì)L.casei LC2W細(xì)胞表面蛋白進(jìn)行了提取。掃描電鏡結(jié)果顯示，抽提后細(xì)胞表面被破壞而