CLA對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞活性和脂肪酸合成關(guān)鍵酶的影響.pdf

1、奶牛乳脂是一種優(yōu)良的天然脂肪，消化率高，是衡量牛乳質(zhì)量重要指標(biāo)之一。乳脂的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值由脂肪酸(FA)決定，不飽和脂肪(UFA)具有重要的生理功能和營(yíng)養(yǎng)作用。奶牛吸收的脂肪酸中大約有3/4被乳腺利用，通過(guò)乳腺中與脂肪酸合成有關(guān)的酶的催化轉(zhuǎn)化合成牛乳中的脂肪酸，從而合成乳脂肪。共軛亞油酸對(duì)乳腺中脂肪酸合成關(guān)鍵酶的基因表達(dá)具有一定影響，改變?nèi)橹局蠪A的組成。
　　 實(shí)驗(yàn)采用組織塊法體外分離培養(yǎng)奶牛乳腺細(xì)胞(BMECs)，鑒定并純化細(xì)胞

2、，分別使用濃度為0μmol/L（對(duì)照）、50μmol/L（低濃度）、100μmol/L（中濃度）和150μmol/L（高濃度）三種濃度的c9，t11 CLA和t10，c12 CLA純品分別作用于BMECs，作用時(shí)間為24 h和48 h（不補(bǔ)充培養(yǎng)液）,測(cè)量細(xì)胞的存活率、凋亡率、細(xì)胞中FA合成關(guān)鍵酶基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平、脂肪酸組成和脂肪酸去飽和酶指數(shù)。分析兩種CLA對(duì)乳腺細(xì)胞中脂肪酸合成的影響。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著兩種CLA

3、濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)極顯著的降低了細(xì)胞存活率(P＜0.01)。CLA作用細(xì)胞24 h和48 h，使用酶標(biāo)儀在490 nm處測(cè)定的吸光值(OD值)，計(jì)算細(xì)胞存活率發(fā)現(xiàn)，低濃度的c9，t11 CLA、高濃度的c9,t11 CLA、低濃度t10，c12 CLA和高濃度的t10，c12 CLA細(xì)胞存活率分別為106.2％、53.0％、79.1％、、64.2％。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率繼續(xù)下降，在48 h時(shí)，存活率分別為82.0％、24.2％

4、、71.0％、27.4％。
　　 隨著兩種CLA濃度的增大，乳腺上皮細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率與對(duì)照相比較顯著增加(P＜0.01)。低、高濃度的c9，t11 CLA和低、高濃度的t10，c12 CLA細(xì)胞凋亡率在24 h分別是對(duì)照組的1.27倍、1.65倍、1.91倍和2.10倍;在48 h時(shí)，分別對(duì)照組的1.67倍、1.95倍、1.38倍、1.83倍。
　　 外源添加c9,t11 CLA對(duì)BMECs脂肪酸合成關(guān)鍵酶基因

5、轉(zhuǎn)錄的影響具有劑量效應(yīng)。試驗(yàn)24h后測(cè)量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，低濃度的c9，t11 CLA顯著抑制FAS、ACC、D5和D6的基因轉(zhuǎn)錄(P＜0.05)，分別下降到43％、40％、44％和19％;高濃度c9,t11 CLA時(shí)，F(xiàn)AS、ACC、D5和D6轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)(P＜0.05)，分別增加到188％、517％、316％和223％。而外源添加不同濃度的c9,t11 CLA均對(duì)SCD1轉(zhuǎn)錄有顯著抑制作用(P＜0.05),分別為13％(50

6、μmol/L)、20％（100μmol/L）和70％（150μmol/L）,但卻促進(jìn)SCD5轉(zhuǎn)錄(P＜0.05)，分別為50μmol/L，167％;100μmol/L，246％;150μmol/L，546％，隨著CLA濃度增加，轉(zhuǎn)錄水平顯著增加(P＜0.05)。外源添加t10，c12 CLA對(duì)BMECs脂肪酸合成關(guān)鍵酶基因轉(zhuǎn)錄的影響同樣具有劑量效應(yīng)。與對(duì)照相比，低濃度的t10，c12 CLA顯著上調(diào)了ACC、SCD5、D5和D6的基因轉(zhuǎn)

7、錄水平(P＜0.05)，分別為對(duì)照的265％、450％、300％和163％，但對(duì)FAS轉(zhuǎn)錄無(wú)顯著作用(P＞0.05),高濃度t10,c12 CLA時(shí),FAS、ACC、SCD5、D5和D6轉(zhuǎn)錄水平都顯著受到抑制(P＜0.05),分別為對(duì)照的3％、49％、55％、18％和14％。不同濃度的t10，c12 CLA均對(duì)SCD1轉(zhuǎn)錄有顯著抑制作用(P＜0.05)，分別為對(duì)照組的10％(50μmol/L)、1％(100μmol/L)和1％(150μ

8、mol/L)，同樣隨著CLA濃度的增加，抑制作用加強(qiáng)。
　　 SCD酶各指數(shù)反映了脂肪酸組成中的UFA比例。隨著c9，t11 CLA濃度的增加UFA比例總體上呈上升趨勢(shì)，但t10,c12 CLA卻相反，差異顯著(P＜0.05)。
　　 綜上所述，高濃度c9，t11 CLA和t10，c12 CLA減低細(xì)胞存活率，凋亡細(xì)胞增加。而不同濃度的兩種CLA對(duì)細(xì)胞中脂肪酸合成關(guān)鍵酶的活性也具有很大影響，特別是高濃度的c9，t11CL