蘋果渣益生菌的篩選及發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑的研究.pdf

1、蘋果渣是蘋果加工業(yè)的主要副產(chǎn)物，我國每年加工產(chǎn)生的蘋果渣約有100多萬噸，蘋果渣資源的合理利用，是促進(jìn)蘋果加工產(chǎn)業(yè)高效發(fā)展和減少生態(tài)環(huán)境污染的重要途徑。微生態(tài)制劑具有改善動(dòng)物體內(nèi)微生態(tài)平衡、預(yù)防疾病、促進(jìn)生長及凈化養(yǎng)殖環(huán)境等作用，研發(fā)新型微生態(tài)制劑，是實(shí)現(xiàn)動(dòng)物飼養(yǎng)安全、健康、無殘留污染的無抗養(yǎng)殖的有效途徑。本文以蘋果渣為原料，研究了自然發(fā)酵蘋果渣中的微生物組成，分離篩選了有益乳酸菌、酵母菌株，優(yōu)化了單菌及混菌制備微生態(tài)制劑的發(fā)酵工藝，初

2、步確定了微生態(tài)制劑的質(zhì)量指標(biāo)。主要結(jié)果和結(jié)論如下:
　　1.蘋果渣微生物組成分析及發(fā)酵益生菌的篩選
　　從自然發(fā)酵蘋果渣中分離純化得到10株菌，通過形態(tài)學(xué)觀察、生理生化測(cè)定，結(jié)合ITS區(qū)、26S rRNA和16S rRNA基因序列分析等多相分類法對(duì)菌株進(jìn)行了鑒定。初步確定為:黑曲霉(Aspergillus niger)，白地霉（Galactomyces geotrichum），馬克斯克魯維酵母(Kluyveromyces m

3、arxianus)，煙曲霉(Aspergillus fumigatus)，乳酸乳球菌（Lactococus lactis），青霉（Penicillium paneum），假絲酵母（Candidatartarivorans），植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)和東方伊薩酵母（Issatchenkiaorientalis）;其主要微生物組成為酵母菌和乳酸菌。對(duì)5株供試菌進(jìn)行單因素試驗(yàn)，以發(fā)酵后菌落總數(shù)為指標(biāo)，確定干

4、酪乳桿菌和馬克斯克魯維酵母為發(fā)酵菌株。
　　2.單菌固態(tài)發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化
　　通過單因素試驗(yàn)，研究了不同氮源對(duì)干酪乳桿菌固態(tài)發(fā)酵的影響，確定了發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:蘋果渣50g/500mL，尿素3％，磷酸氫二鉀0.2％，水料比1.2∶1;優(yōu)化得到干酪乳桿菌蘋果渣發(fā)酵條件為:接種量7.5％，發(fā)酵溫度33℃，發(fā)酵時(shí)間79h，在此條件下進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，菌落總數(shù)達(dá)到6.235×109CFU/g。通過單因素試驗(yàn)，考察了不同氮源對(duì)克魯維酵母

5、固態(tài)發(fā)酵的影響，確定了發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:蘋果渣40g/500mL，尿素2％，磷酸氫二鉀0.3％，水料比1.0∶1;優(yōu)化得到的克魯維酵母蘋果渣發(fā)酵條件為:接種量6.6％，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時(shí)間73h，在此條件下進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，菌落總數(shù)達(dá)到2.862×109CFU/g。
　　3.混菌固態(tài)發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化
　　通過單因素試驗(yàn)，研究了不同氮源對(duì)蘋果渣混菌發(fā)酵的影響，并確定了蘋果渣發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:蘋果渣39g/500mL，尿素3％

6、，磷酸氫二鉀0.3％，水料比1.2∶1。
　　通過單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，確定了蘋果渣混菌發(fā)酵條件為:接種量9％，接種比1∶2（乳酸菌∶酵母菌），發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵時(shí)間92h，在此條件下進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，菌落總數(shù)達(dá)到8.347×109CFU/g。
　　4.菌劑制備及質(zhì)量穩(wěn)定性分析
　　采用優(yōu)化的發(fā)酵條件發(fā)酵蘋果渣，試制菌劑，進(jìn)行復(fù)合酶活和多糖等指標(biāo)測(cè)定。研究顯示，干酪乳桿菌發(fā)酵的酶活結(jié)果為纖維素酶18.05u/g，木聚糖