飼用微生態(tài)制劑優(yōu)良菌株鑒定及發(fā)酵工藝研究.pdf

1、我國畜產(chǎn)品出口的壁壘主要是畜禽疫病及產(chǎn)品中的藥物殘留問題，這是影響我國畜禽產(chǎn)品走進國際市場的關鍵。我國畜牧業(yè)占農(nóng)業(yè)很大比例，因此研制新的飼料以及飼料添加劑，特別是生物制劑，是實現(xiàn)安全、無污染、無殘留的綠色畜產(chǎn)品生產(chǎn)的重要途徑。 本研究對分離菌株進行了形態(tài)、生態(tài)和生理生化特征的分析及分子生物學鑒定；通過菌株的相關性質(zhì)的研究，對菌株的作用機理做一初步探討；對菌株的液體、固態(tài)及混菌發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化研究；通過動物喂養(yǎng)實驗，確定了微生態(tài)

2、制劑的作用效果。研究結(jié)果表明： 1.通過對兩株芽孢桿菌B02和B03的形態(tài)特征、生態(tài)特征及生理生化特征的分析，可初步初步鑒定2株菌為蠟樣芽孢桿菌。16S rDNA序列同源性分析結(jié)果表明：B02和B03菌株均為Bacillus cepeus(蠟樣芽孢桿菌)。毒理試驗表明，2株菌在正常使用量內(nèi)安全無毒。同時分離獲得了2株優(yōu)良的產(chǎn)酶菌株：煙曲霉F10和米曲霉F20，并確定了其分類地位和安全性。 2.通過相關性質(zhì)實驗，初步確立了

3、菌株B02和B03的抑病促生機理是以生物奪氧機制為主，菌群平衡為輔，同時產(chǎn)生的多種有益代謝產(chǎn)物可提高動物的消化吸收率。 3.優(yōu)化了蠟樣芽孢桿菌菌株B02的液體發(fā)酵工藝和固體發(fā)酵工藝，其液體發(fā)酵最佳工藝為：豆粕0.2 g·kg<'-1>,KCL0.02 g·kg<'-1>，初始pH5.0，培養(yǎng)溫度35℃；固體最佳工藝為：麥草和麩皮7份，油渣3份，初始pH7.5，基質(zhì)含水量85％，接種量10<'6>個/ml，培養(yǎng)溫度33～35℃。為

4、微生態(tài)制劑的生產(chǎn)應用提供了良好的理論依據(jù)和技術(shù)支撐。 4.對菌株B02進行芽孢形成條件的優(yōu)化，結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中適當添加Ca<'2+>或Mg<'2+>可顯著提高其生長速率、生長量及促進芽孢形成。 5.優(yōu)化了2株曲霉菌株F10和F20的固體發(fā)酵工藝，并確定了應用臘樣芽孢桿菌B02和煙曲霉F10的混菌固態(tài)發(fā)酵工藝，菌株B02和FG10混菌發(fā)酵的最佳條件為初始pH7、接種量10<'5>個/ml，35℃下培養(yǎng)60 h。在此條件

5、下，菌株B02的菌數(shù)可達1.792×10<'13>cfu/ml；固態(tài)基質(zhì)的纖維素酶活可達6 028.5 μg·(g·min)<'-1>。為飼用酶制劑和復合微生態(tài)制劑的生產(chǎn)應用提供了優(yōu)良生產(chǎn)菌株和良好的理論依據(jù)。 6.動物試驗結(jié)果表明：復合微生態(tài)制劑按5.0×10<'7>個·kg<'-1>劑量投服，對豬霍亂沙門氏菌性腸炎有較好的預防效果；按2.0×10<'8>個·kg<'-1>劑量投服，對豬霍亂沙門氏菌性腸炎的治愈率可達90％，與