基于L-組氨酸骨架的氨肽酶N抑制劑的設(shè)計(jì),合成及活性研究.pdf

1、氨肽酶N（Aminopeptidase N，APN）(EC3.4.11.2)，與人類淋巴細(xì)胞表面分化抗原 CD13，屬同種物質(zhì)，是一種 II型外肽酶，具有鋅離子依賴性，隸屬于M1家族。在其活性中心，具有高度保守的序列(HEXXH-X18-E)。在自然界，APN是一種廣泛存在的多功能的酶，在許多組織中都有表達(dá)，在腎、小腸刷狀緣膜高度表達(dá)。在腦、肺、血管組織也發(fā)現(xiàn)其存在。在許多轉(zhuǎn)移性的惡性腫瘤細(xì)胞中都檢測(cè)到APN的表達(dá)，如前列腺癌、黑色素瘤

2、、卵巢癌、腸癌、腎癌等，及非實(shí)體瘤，白血病和淋巴瘤。APN在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、侵襲、遷移及血管生成等過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，其抑制劑能夠有效的抑制腫瘤細(xì)胞活性，因此，APN成為開(kāi)發(fā)抗腫瘤藥物的重要靶點(diǎn)。
　　本課題以大腸桿菌APN為靶點(diǎn)，以其活性位點(diǎn)結(jié)構(gòu)和與 Bestatin的作用模式為基礎(chǔ)，借鑒已發(fā)表的小分子抑制劑結(jié)構(gòu)，選取 L-組氨酸作為抑制劑的骨架結(jié)構(gòu)，引入異羥肟酸作為鋅離子螯合基團(tuán)，咪唑環(huán)和氨基N原子連接疏水性芳香側(cè)鏈，以

3、深入鋅離子兩側(cè)的疏水口袋。基于此思路，設(shè)計(jì)了一系列L-組氨酸衍生物，借助計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)軟件Sybyl進(jìn)行對(duì)接打分，選取打分較高的化合物進(jìn)行合成。
　　本課題以L-組氨酸為起始原料，經(jīng)過(guò)羧基成甲酯保護(hù)、Boc保護(hù)、N取代反應(yīng)、去保護(hù)反應(yīng)、?；磻?yīng)、氨解反應(yīng)，得到最終目標(biāo)化合物。關(guān)鍵中間體和目標(biāo)化合物經(jīng)核磁共振氫譜、離子阱質(zhì)譜等確證結(jié)構(gòu)。之后，對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行了體外抑酶、抗腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移等初步生物活性測(cè)試。<

4、br>　　本課題共合成26個(gè)L-組氨酸衍生物。在體外抑酶活性測(cè)試中，多數(shù)化合物對(duì)APN具有一定的抑制作用，其中，化合物01b、01c、01e、02b、05c活性較高，接近于 Bestatin，01b的活性(IC50=3.51±0.44)甚至優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照 Bestatin(IC50=10.41±1.68)。抑制ES-2、MDA-MB-231細(xì)胞表面APN的實(shí)驗(yàn)中，除個(gè)別化合物，其他化合物對(duì)ES-2的抑制活性高于 MDA-MB-231。推測(cè)