同軸靜電紡絲法制備載雙營養(yǎng)因子活性神經(jīng)組織工程支架.pdf

1、基于組織工程支架、種子細(xì)胞和生長因子三大要素，從仿生細(xì)胞外基質(zhì)的角度，研究和開發(fā)生物活性替代物，用于創(chuàng)傷組織修復(fù)以及組織再生，是組織工程領(lǐng)域長久的任務(wù)和挑戰(zhàn)。外周神經(jīng)損傷是臨床上的常見疾患，主要由事故造成的創(chuàng)傷引起。目前修復(fù)神經(jīng)斷裂和缺損的手術(shù)通常是直接縫合和使用了病人其他部位相對不重要的神經(jīng)來替代，具有一定的局限性。神經(jīng)支架復(fù)合神經(jīng)營養(yǎng)因子和種子細(xì)胞為長距離神經(jīng)缺損修復(fù)帶來新的希望，然而普通的“物理吸附”復(fù)合神經(jīng)營養(yǎng)因子的方法效果并不

2、理想，因此，制備一種負(fù)載營養(yǎng)因子、提高營養(yǎng)因子緩釋性能并能保護(hù)其生物活性的神經(jīng)支架至關(guān)重要。
　　本研究中，我們采用同軸靜電紡絲技術(shù)制備出同時負(fù)載單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）和神經(jīng)生長因子（NGF）雙神經(jīng)營養(yǎng)因子并保持它們部分活性的納米纖維支架，同時采用高速旋轉(zhuǎn)滾筒接收裝置使該活性支架具有取向結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)與正常神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)相似。這種靜電紡納米纖維支架比表面積大，孔隙率高，纖維按一定方向排列，且具有活性神經(jīng)營養(yǎng)因子。掃描電

3、子顯微鏡（SEM）和透射電子顯微鏡（TEM）分別表征得到這種靜電紡納米纖維具有很好的取向度，纖維有連續(xù)的“芯-殼”結(jié)構(gòu)，絲素蛋白(SF)/聚乳酸己內(nèi)酯(PLCL)殼層相和GM1/NGF芯層相之間有明顯的分界面。接觸角測試顯示絲素蛋白的加入提高了該支架的親水性能，此外，力學(xué)測試結(jié)果證明該支架在平行于纖維方向上具備良好的力學(xué)性能。
　　神經(jīng)營養(yǎng)因子體外釋放實(shí)驗(yàn)研究通過在一定的時間點(diǎn)用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測，得出緩釋液濃度，計(jì)算出緩釋量

4、和累積緩釋量后作出體外釋放行為曲線圖。釋放行為曲線圖分析表明，無論是單獨(dú)負(fù)載還是共同負(fù)載，GM1和NGF均能在一開始的突釋階段后以持續(xù)穩(wěn)定的方式釋放到環(huán)境介質(zhì)中。隨后我們大鼠腎上腺嗜鎘瘤細(xì)胞（PC12未分化）培養(yǎng)形態(tài)對比實(shí)驗(yàn)檢測出釋放后的NGF依然保持一定活性，用大鼠雪旺細(xì)胞（SCs）細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測出釋放后的GM1也具有一定的活性。
　　體外生物相容性測試以SCs和PC12（未分化）作為種子細(xì)胞。MTT結(jié)果表明，負(fù)載雙營養(yǎng)因子靜