清開靈注射液中致敏物質(zhì)的研究.pdf

1、清開靈注射液(QKL)是一種現(xiàn)代純中藥復(fù)方注射劑，源自我國傳統(tǒng)良方“安宮牛黃丸”，廣泛應(yīng)用于清熱解毒、熱病神昏、抗病毒、抗肝炎和心血管病等多個治療領(lǐng)域。但是由于中藥注射劑(TCMI)化學(xué)成分復(fù)雜，且人體過敏反應(yīng)原因尚未完全闡明，因此TCMI的過敏問題一直是中藥現(xiàn)代化發(fā)展的瓶頸。本研究試圖建立針對QKL致敏物質(zhì)的快速、靈敏的檢驗方法，將植物活性追蹤法與細(xì)胞致敏實驗有機(jī)結(jié)合起來，在明確其致敏成分基礎(chǔ)上進(jìn)一步建立去除雜質(zhì)的方法，從而為TCMI

2、的發(fā)展提供重要的理論基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　 1、使用超濾膜對QKL水牛角和珍珠母水解液注射液進(jìn)行了組分分離，并使用HPLC、MS和NMR分析了QKL中的引起RBL-2H3細(xì)胞發(fā)生脫顆粒的三種組分注射液，結(jié)合組分致敏性評價，得到可疑致敏物質(zhì)的相關(guān)信息。研究發(fā)現(xiàn)水牛角和珍珠母水解液注射液中分子量3000以上的蛋白具有致敏效應(yīng);豬去氧膽酸注射液中殘留的膽酸為可疑致敏物質(zhì);梔子注射液中引起細(xì)胞致敏效應(yīng)的差異峰經(jīng)LC-MS分

3、析，得到差異峰的分子量，為對差異峰的鑒定提供了數(shù)據(jù)支持。
　　 2、利用植物活性成分追蹤法與細(xì)胞致敏實驗有機(jī)結(jié)合，首先使用有機(jī)溶劑對梔子提取液進(jìn)行萃取分離操作，將具有致敏活性的組分富集到氯仿層中;再經(jīng)過薄層層析色譜條件探索，使用硅膠柱層析方法對氯仿層的成分進(jìn)行進(jìn)一步分離，得到28個部分，并通過細(xì)胞致敏實驗對成分的致敏性評價，將過敏成分錨定在其中的7號到13號組分中。
　　 3、利用植物活性成分追蹤法與細(xì)胞致敏實驗有機(jī)結(jié)合

4、，首先使用有機(jī)溶劑對梔子提取液進(jìn)行萃取分離操作，將具有致敏活性的組分富集到水相中;再經(jīng)中壓制備色譜和高效制備色譜進(jìn)行多級分離，通過檢測細(xì)胞致敏實驗中的細(xì)胞內(nèi)的組胺、β-己糖苷酶和鈣離子的熒光強(qiáng)度變化情況為指標(biāo)，分離得到了兩個能夠引起肥大細(xì)胞發(fā)生脫顆粒效應(yīng)的致敏組分。經(jīng)純度分析和結(jié)構(gòu)判定，確定這兩個成分主要由京尼平苷和蔗糖組成，但其中仍有微量的雜質(zhì)。正是這微量的雜質(zhì)，具有致敏活性，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生類過敏反應(yīng)。
　　 4、通過篩選樹脂類