清開靈注射液生產(chǎn)在線檢測與質(zhì)量評價方法研究.pdf

1、目的：制藥生產(chǎn)在線檢測及控制是對過程數(shù)據(jù)實時采集、傳輸、處理及建模的整合，以達到對生產(chǎn)過程中各環(huán)節(jié)影響質(zhì)量的因素進行控制，保證產(chǎn)品穩(wěn)定、均一。實現(xiàn)生產(chǎn)過程中的在線質(zhì)量控制是中藥質(zhì)量控制的發(fā)展方向。本研究以清開靈注射液的生產(chǎn)為載體，確定其過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對各中間體及成品建立適合于在線檢測的快速質(zhì)量判斷方法，為清開靈注射液的在線質(zhì)量控制提供方法學(xué)依據(jù)。 方法：清開靈注射液的處方組成為：膽酸、豬去氧膽酸、珍珠母、板藍根、水牛角、黃芩苷

2、、梔子、金銀花等。采用不同測試技術(shù)間的相關(guān)分析建立指標(biāo)成分的快速定量方法；采用UV光譜相似度比較建立整體性、均一性的快速判斷方法。對各中間體及成品的快速質(zhì)量評價方法如下：一、本文比較了3種方法快速測定水解液、板蘭根提取液中總氮含量：①改良的茚三酮比色法反應(yīng)條件：樣品初始pH=8.0，沸水浴6min，2％茚三酮溶液1mL，pH=8.0的緩沖液0.5mL。根據(jù)茚三酮反應(yīng)后的UV光譜，選擇相關(guān)性較好的波長點，建立總氮含量的預(yù)測方程；②總炭/總

3、氮(TOC/TN)法燃燒爐溫度為720℃，TNM-1單元流速為500mL·min-1，載氣為高純空氣，檢測器為化學(xué)發(fā)光檢測器；③NIR光譜法水解液和板藍根提取液均采用原始光譜，數(shù)據(jù)處理方法均為逐步多元線性回歸(SMLR)，測定水解液選擇的波數(shù)點為6608.86cm-1和7170.04cm-1，測定板藍根提取液選擇的波數(shù)點為7160.4cm-1和7166.18cm-1。二、梔子提取液的快速質(zhì)量評價：HPLC測定多批梔子提取液中梔子苷的含量

4、，確定判別梔子提取液質(zhì)量的梔子苷含量范圍，選擇梔子提取液的UV光譜中和梔子苷含量相關(guān)性最好的波長點，采用相關(guān)分析法建立梔子苷含量的預(yù)測方程，根據(jù)預(yù)測結(jié)果及范圍判別梔子液的質(zhì)量。三、金銀花提取液的快速質(zhì)量評價：HPLC測定多批金銀花提取液中綠原酸的含量，確定判別金銀花提取液質(zhì)量的綠原酸含量范圍，選擇和綠原酸含量相關(guān)性最好的UV光譜類型和波長，采用相關(guān)分析的方法建立綠原酸含量的預(yù)測方程，根據(jù)預(yù)測結(jié)果及綠原酸的含量范圍判別金銀花提取液的質(zhì)量。

5、四、四混液的快速質(zhì)量評價：1、NIR光譜法預(yù)測總氮及梔子苷含量選用原始光譜，數(shù)據(jù)處理方法為SMLR，總氮含量預(yù)測模型的光譜為7185.47和5384.28cm-1，梔子苷含量預(yù)測模型的波數(shù)點為5372.71cm-1和4362.19cm-1；2、UV光譜的相似度比較判斷整體性及均一性以四混液中總氮和梔子苷含量的上下限為依據(jù)，配制具有代表性的四混液，測定UV光譜，比較相似度，確定合格四混液的相似度范圍，建立質(zhì)量判斷模型。五、膽酸混合液的快速

6、質(zhì)量評價：考察乙醇濃度對膽酸、豬去氧膽酸及其在膽酸混合液中溶解度的影響，通過控制乙醇濃度控制膽酸混合液的質(zhì)量。六、六混液的快速質(zhì)量評價：以六混液中膽酸、總氮和梔子苷含量的上下限為標(biāo)準(zhǔn)，通過向六混液中加入不同的組成溶液或以不同的組成溶液為參比，配制具有代表性的六混液樣本，選擇其UV一階導(dǎo)數(shù)光譜中富含信息的光譜區(qū)域，確定合格樣本的各波長點導(dǎo)數(shù)值的范圍，界定合格樣本的相似度數(shù)值，評價未知樣本的質(zhì)量。七、銀黃液的快速質(zhì)量評價：通過HPLC與UV

7、相關(guān)分析，利用雙波長法建立綠原酸和黃芩苷的含量預(yù)測方程，根據(jù)預(yù)測結(jié)果及銀黃液中黃芩苷和綠原酸的含量范圍判別銀黃液的質(zhì)量。八、采用NIR光譜法建立清開靈注射液中黃芩苷、膽酸、梔子苷和總氮含量的預(yù)測方程，選用原始光譜，數(shù)據(jù)處理方法為SMLR，測定黃芩苷選擇的波數(shù)點為6477.72cm-1和5629.19cm-1；測定膽酸選擇的波數(shù)點為4674.6cm-1和4454.76cm-1；測定梔子苷選擇的波數(shù)點為6618.5cm-1和5258.93c

8、m-1；測定總氮選擇的波數(shù)點為5386.21cm-1和7222.11cm-1。結(jié)果：一、①水解液總氮含量的茚三酮測定方程：C總氮含量(mg·mL-1)=9.3925×A401nm+2.8147(r=0.9899，n=15)；板蘭根提取液總氮含量的茚三酮測定方程：C總氮含量(mg·mL-1)=8.5627×A401m+1.4253(r=0.9211，n=15)；②所測中間體及成品中，TOC/TN法與凱氏定氮法比較，兩者間相關(guān)系數(shù)為0.99

9、99，最大的相對偏差為3.36％； ③水解液中總氮含量的預(yù)測值與凱氏定氮法測得值間的相關(guān)系數(shù)和交叉驗均方差(RMSECV)分別為0.96152、0.856，板藍根提取液中總氮含量的預(yù)測值與凱氏定氮法測得值間的相關(guān)系數(shù)和RMSECV分別為0.96847、0.811。二、梔子苷含量的預(yù)測方程： C板子苷(mg·mL-1)=8.80×A242nm-0.05(r=0.9921，n=22)；判別梔子液合格的區(qū)間： 8.5＜

10、8.80×A242nm-0.05＜16(mg·mL-1)。三、金銀花提取液中綠原酸含量測定的UV光譜最佳波長為294nm，其一階導(dǎo)數(shù)光譜的最佳波長為316nm，相應(yīng)的關(guān)系方程：C綠原酸含量(mg·mL-1)=2.654498×A294nm-0.093438(r=0.9919n=28)，C綠原酸含量(mg·mL-1)=506.2543×D316nm+0.1771(r=0.9959n=28)，判別金銀花提取液合格的區(qū)間： 0.4＜2

11、.654498×A29nm-0.093438＜4.0(mg·mL-1)。四、①四混液中總氮含量的預(yù)測值與凱氏定氮法測得值間的相關(guān)系數(shù)和RMSECV分別為0.93452和0.344；梔子苷含量的預(yù)測值與HPLC測得值間的相關(guān)系數(shù)和RMSECV分別為0.90412和0.110。②以相似度大于90％為限，結(jié)果的誤判率為0。五、乙醇濃度達到48％時，處方量的膽酸完全溶解；乙醇濃度達到42％時，處方量的豬去氧膽酸完全溶解，乙醇濃度達到45％時，膽

12、酸混合液中膽酸和豬去氧膽酸在乙醇中都完全溶解。六、六混液相似度分界值為0.86，結(jié)果的誤判率為3.33％。七、銀黃液中黃芩苷含量的預(yù)測方程：C黃芩苷(mg·mL-1)=0.0299×A276nm-0.0216×A323nm(r=0.9906，n=28)；綠原酸含量的預(yù)測方程：C綠原酸(mg·mL-1)=-0.0015×A276nm+0.0026×A323nm(r=0.9187，n=25)。八、黃芩苷、膽酸、梔子苷和總氮含量的預(yù)測值與測得

13、值間的相關(guān)系數(shù)分別為0.87677、0.85726、0.88978和0.85726；各預(yù)測方程的RMSECV分別0.239、0.241、0.0317和0.241。 結(jié)論：本文明確了清開靈注射液生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，確定了在線質(zhì)量控制的質(zhì)量指標(biāo)，通過不同分析測試技術(shù)間的相關(guān)分析，建立了中間體及成品中指標(biāo)成分的快速定量方法，通過比較UV光譜的相似度值，建立了混合液均一性、整體性的判別方法。該研究為復(fù)雜體系中化學(xué)成分的快速定量及整體性