綠色木霉的固定化技術(shù)研究.pdf

1、纖維素酶是一種極其重要的工業(yè)酶，綠色木霉是分泌纖維素酶的高產(chǎn)菌種，綠色木霉分泌的纖維素酶對(duì)纖維素類(lèi)物質(zhì)有很強(qiáng)的降解作用，所以對(duì)綠色木霉進(jìn)行固定化有助于工業(yè)化生產(chǎn)纖維素酶和提高纖維素酶的活力。目前對(duì)綠色木霉的固定化主要采用包埋法。包埋法雖然有效的增強(qiáng)了綠色木霉對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力，解決了綠色木霉與發(fā)酵液分離的難題，提高了纖維素酶的活性，但是此種固定化方法成本較高，過(guò)程復(fù)雜，固定化的膠球在反復(fù)使用后逐漸變小消失，所以包埋法固定化的綠色木霉不利于

2、大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)纖維素酶。為了解決上述問(wèn)題，本文研究了綠色木霉的自絮凝固定化條件。得到如下結(jié)果。
　　1.采用PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的綠色木霉產(chǎn)綠色孢子的最佳條件是:在100 mL三角瓶中添加10 mL的PDA培養(yǎng)基;遮光培養(yǎng);溫度25℃;培養(yǎng)5d，培養(yǎng)基表面可長(zhǎng)出深綠色的孢子。
　　2.采用單因素變量方法與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)綠色木霉固定化條件進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)綠色木霉的自絮凝固定化條件是:pH為6，體積為70 mL，葡萄糖濃度為2

3、.25％，蛋白胨濃度為1.50％，固定化6d。自絮凝固定的綠色木霉發(fā)酵培養(yǎng)后纖維素酶活力約為3.6 U。蛋白胨對(duì)自絮凝固定化綠色木霉的產(chǎn)酶能力具有明顯的影響。
　　3.采用單因素變量方法、正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法和響應(yīng)面分析法對(duì)自絮凝固定化綠色木霉發(fā)酵產(chǎn)纖維酶的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。發(fā)現(xiàn)最佳培養(yǎng)基為:玉米粉為5％、(NH4)2SO4為0.15％、CaCl2為0.02％、KH2PO4為0.11％;經(jīng)響應(yīng)面分析得到因子貢獻(xiàn)率為:(NH4)2SO4＞

4、 KH2PO4＞CaCl2。自絮凝固定化綠色木霉產(chǎn)纖維素酶的最佳條件為:pH5、溫度28℃、體積60mL、時(shí)間4d。按照以上發(fā)酵條件進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，纖維素酶活可達(dá)到7U。
　　4.對(duì)自絮凝固定化綠色木霉產(chǎn)纖維素酶的能力與其它方法產(chǎn)纖維素酶的能力進(jìn)行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，包埋法固定化綠色木霉分泌的纖維素酶活性為9.24 U，游離黑曲霉分泌的酶活為6.19 U。游離綠色木霉分泌的酶活為6.4 U。只有包埋法固定化的綠色木霉分泌的酶活性高于自