農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽基因EhHOG對大麥幼胚及其愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、大麥(Hordeum vulgare L.)是世界上僅次于小麥、水稻和玉米的禾本科作物，具有較高的營養(yǎng)價值和重要的應(yīng)用價值在世界范圍類廣泛種植，是分子育種的重要模式作物之一。近年來，育種家們開始利用基因工程手段培育抗逆高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)大麥品種。隨著全球生態(tài)環(huán)境的破壞，大面積鹽堿地嚴(yán)重阻礙大麥的正常生長繁殖。源于以色列死海絲狀真菌E.herbariorum的EhHOG為編碼絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)的基因，對鹽害有很強的耐性。本研究構(gòu)建了高效

2、表達的耐鹽基因HOG載體，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方式，對3個大麥品種幼胚和愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化情況進行了研究，主要結(jié)果如下:
　　(1)以大麥品種Golden promise、華大麥4號和華大麥7號的幼胚為實驗材料，分別研究了蔗糖和麥芽糖作糖源對大麥幼胚向愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響，結(jié)果表明，麥芽糖和蔗糖都可以作為大麥幼胚誘導(dǎo)和分化培養(yǎng)基的糖源，但麥芽糖誘導(dǎo)率和分化率稍稍高一點。同時研究表明，1g/l的酸水解酪蛋白對大麥愈傷組織誘導(dǎo)有一定促

3、進作用。
　　(2)表達載體以pCAMBIA1300為基本骨架，加入pUbi啟動子和tNos終止子命名為pCAMBIA13001;通過PCR在HOG基因兩端引入酶切位點Bam HI和Sac I，擴增后與pMD-18T載體連接;分別回收雙酶切后的HOG片段和pCAMBIA13001載體片段，并用T4連接酶連接，得到含有目的基因的重組質(zhì)粒pCAMBIA13001-B;利用電擊法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌AGL1中，為進一步遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。<

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