姜黃素衍生物對(duì)實(shí)驗(yàn)性非酒精性脂肪肝的治療作用.pdf

1、目的:觀察并比較姜黃素及其衍生物對(duì)實(shí)驗(yàn)性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治療作用。
　　 方法:(1)大鼠NASH模型的建立:60只雄性SD大鼠按完全隨機(jī)分組原則進(jìn)行分組,分為正常組(A組)、模型組(B組)、生理鹽水組(C組)、姜黃素灌胃組(D組)、姜黃素衍生物組(E組)。每組12只。A組分別飼以普通飼料和自來水。B、C、D、E組于四肢內(nèi)側(cè)皮下注射40％CCl4:石蠟油溶液,劑量為3 ml/kg,每周2次,首劑加倍;同時(shí)給予含7

2、9.5%玉米面、20%豬油、0.5%膽固醇高脂飲食。6周后處死A組及B組大鼠各3只,血清及病理檢測(cè)觀察脂肪肝模型制作效果。
　　 (2)檢測(cè)姜黃素及其衍生物對(duì)NASH的治療作用及其機(jī)制:造模6周后,處死A、B兩組所有大鼠。同時(shí),D組給予姜黃素灌胃,劑量50mg/kg,2ml/次,每日1次;C組、E組分別給予生理鹽水及姜黃素衍生物尾靜脈注射,劑量50mg/kg,每日1次;連續(xù)治療兩周。治療時(shí)繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過程中每周稱重一次

3、,以調(diào)整CCl4及用藥劑量。治療結(jié)束后取血及肝組織,計(jì)算肝指數(shù),進(jìn)行血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TCH)含量檢測(cè)。肝組織行HE及油紅O染色觀察肝組織病理組織學(xué)改變。RT-PCR法檢測(cè)肝組織中TNF-α、NF-κB、FAS、HMG-CoA還原酶的mRNA的轉(zhuǎn)錄,Western blot檢測(cè)TNF-α及NF-κB蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠體重均有所增加。除正常組

4、外,所有大鼠的肝指數(shù)均超過5%,達(dá)到了脂肪肝的診斷要求,模型組肝指數(shù)較正常組明顯增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HE染色可見模型組大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的損傷性病理改變,肝細(xì)胞普遍脂肪變性,炎癥壞死及出血明顯,少數(shù)大鼠的肝臟匯管區(qū)還可見明顯的纖維組織增生。模型組脂肪變程度及炎癥分級(jí)幾乎處于最高級(jí),但纖維化程度較輕。與正常組比較,模型組大鼠的血清ALT、AST、TCH水平均明顯升高(P＜0.05);TNF-α、NF-κB、FAS及HMG-

5、CoA還原酶四種基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(RQ＞1);NF-κB、TNF-α兩種蛋白表達(dá)量明顯升高。
　　 (2)經(jīng)生理鹽水、姜黃素及姜黃素衍生物治療后,所有大鼠肝指數(shù)均有所下降,與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。姜黃素及衍生物組血清ALT、AST、TCH均低于生理鹽水組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＜0.05)。其中,在血清ALT、AST。指標(biāo)中,衍生物組的水平明顯低于灌胃組,二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

6、5)。甘油三酯水平(TG)在治療前后無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。HE及油紅O染色可見姜黃素衍生物組大鼠較模型組肝臟脂肪變明顯減輕,炎癥分級(jí)也明顯好轉(zhuǎn)。與生理鹽水組比較,姜黃素衍生物組纖維化程度輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。灌胃組與模型組比較其脂肪變程度,炎癥分級(jí)以及纖維化程度均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。RT-PCR結(jié)果提示經(jīng)姜黃素及其衍生物治療后肝組織中TNF-α、NF-κB、HMG-CoA還原酶及FA