miR-21通過抑制PTEN-PI3K-Akt信號通路減弱小鼠肝細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷.pdf

1、目的：
　　探討miR-21對小鼠原代肝細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響及分子機制研究。
　　方法：
　　運用改良的原位兩步膠原酶灌流法提取成年小鼠原代肝細(xì)胞，建立肝細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型，實驗分為4組：對照組（正常培養(yǎng)），H/R組（進行H/R處理），空載組（轉(zhuǎn)染空白lip2000后進行H/R處理），miR-21+H/R組（轉(zhuǎn)染agomir-21后進行H/R處理），Real-time PCR檢測各組細(xì)胞 miR-21表達(dá)水平，流式

2、細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況，Western blot檢測PTEN/PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平。為進一步探索miR-21對PTEN的調(diào)控作用，在細(xì)胞缺氧/復(fù)氧前轉(zhuǎn)染ago mir-21并使用PI3K抑制劑進行處理，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況，Wes tern b lo t檢測PTEN/PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　與對照組相比，H/R組、空載組及miR-21+H/R組細(xì)胞miR-21

3、表達(dá)明顯升高，miR-21+H/R組細(xì)胞miR-21表達(dá)較H/R組及空載組亦升高，miR-21過表達(dá)可減少肝細(xì)胞凋亡，抑制PTEN蛋白表達(dá)，導(dǎo)致Akt磷酸化增加，Bcl-2表達(dá)上升，Bcl-2/Bax比值升高，caspase-3表達(dá)相對下降。而PI3K抑制劑處理抑制了miR-21過表達(dá)所產(chǎn)生的抗凋亡作用，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率升高。
　　結(jié)論：
　　miR-21可抑制缺氧/復(fù)氧導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡，在肝細(xì)胞缺氧/復(fù)氧過程中起保護作用，這