Gas6經(jīng)PI3K-Akt存活通路保護缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：觀察外源重組人生長停滯特異性蛋白6（rhGas6）對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的原代乳鼠心肌細(xì)胞及H9c2心肌細(xì)胞系損傷的影響，并初步探討其與磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）存活通路的關(guān)系。
　　 方法：第一部分對體外培養(yǎng)的原代乳鼠心肌細(xì)胞及H9c2細(xì)胞分別進行缺氧復(fù)氧，模擬大鼠心肌缺血再灌注模型，將培養(yǎng)的兩種細(xì)胞隨機各分為3組：正常對照組（Control組）、缺氧/復(fù)氧組（A/R組）及缺氧/復(fù)氧+Gas6預(yù)處理組（A/

2、R+rhGas6組）。觀察各組細(xì)胞形態(tài)及原代心肌細(xì)胞搏動頻率，檢測細(xì)胞存活率、LDH濃度及半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）活性變化，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。第二部分將培養(yǎng)的H9c2細(xì)胞隨機分為4組：正常對照組（Control組）、缺氧/復(fù)氧組（A/R組）、缺氧/復(fù)氧+Gas6預(yù)處理組（A/R+rhGas6組）及缺氧/復(fù)氧+Gas6預(yù)處理+PI3K/Akt特異性阻斷劑LY294002干預(yù)組（A/R+rhGas6+LY294002組）

3、。采用AnnxinⅤ-FITC/P雙染法并行流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，免疫印跡法檢測胞內(nèi)磷酸化Akt（pAkt）蛋白表達情況。
　　 結(jié)果：在第一部分原代心肌細(xì)胞中A/R組較Control組心肌細(xì)胞搏動頻率（35±7vs94±3）次/分及生存率（48.5±4.0vs94.2±3.3）均下降（P<0.05），LDH濃度（206.67±16.31vs81.50±5.94）IU/L、Caspase-3活性水平（10.19±0.78vs

4、3.23±0.41）％及凋亡率（14.51±0.82vs2.83±0.42）％均較Control組增加（P<0.05）。但經(jīng)Gas6預(yù)處理后，心肌細(xì)胞搏動頻率（78±6vs35±7）次/分及生存率（83.5±3.6vs48.5±4.0）％均顯著增加（P<0.05），LDH水平（107.22±8.77vs206.67±16.31）IU/L、Caspase-3活性水平（5.17±0.64vs10.19±0.78）％及凋亡率（5.17±0.6

5、4vs14.51±0.82）％均較A/R組降低（P<0.05）。在H9c2細(xì)胞中，與A/R組比較，Gas6預(yù)處理組生存率（82.1±4.3vs43.2±3.5）％也顯著增加（P<0.05），LDH水平（110.67±11.72vs193.83±17.25）IU/L、Caspase-3活性水平（4.63±0.50vs8.86±0.70）％及凋亡率（5.58±0.53vs12.16±0.68）％均下降（P<0.05）。在第二部分，經(jīng)Gas6

6、預(yù)處理的H9c2細(xì)胞的凋亡率明顯低于A/R組（5.87±0.27vs12.14±0.56）％，pAkt表達水平較A/R組增加（1.6269±0.065vs1.3217±0.041，P<0.05）。但Gas6以上作用能被PI3K/Akt通路特異性阻斷劑LY294002抑制，A/R+rhGas6+LY294002組細(xì)胞凋亡率明顯增加（9.92±0.41vs5.87±0.27）％，pAkt表達水平降低（0.2978±0.011vs1.6269