菟絲子黃酮對離體大鼠工作心臟缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、目的：評價菟絲子黃酮（Cuscuta chinensis Lam.Flavonoids,CCLF）對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用；對損傷后心臟收縮功能，細(xì)胞壞死，凋亡指標(biāo)，抗氧化能力和能量代謝功能的影響及其之間的可能聯(lián)系。
　　方法：將Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為三組（n=10），分別為對照組（CK）、缺血再灌注模型組（MOD）和菟絲子黃酮藥物組（CCLF）。采用離體工作心臟全心斷流缺血后恢復(fù)灌流建立缺血再

2、灌注模型，Krebs-Henseleit緩沖液灌注心臟，壓力感應(yīng)探頭連接 PowerLab生理記錄儀經(jīng)主動脈瓣插入左心室記錄左心室收縮功能。正常組心臟穩(wěn)定跳動20 min后繼續(xù)灌流記錄70 min；模型組在穩(wěn)定灌流20 min后停止灌流（保溫保濕），30 min后恢復(fù)灌流，持續(xù)記錄40min，藥物組在斷流前10 min改用含有菟絲子黃酮的灌流液（25 mg/L）灌注心臟，停止灌注30 min后恢復(fù)灌注，持續(xù)記錄40 min；灌注期間接取

3、主動脈流出液和冠狀動脈流出液測量主動脈血流量和冠狀動脈血流量；灌流結(jié)束前接取冠狀動脈流出液測定肌酸激酶活性；灌流結(jié)束后取下心臟稱重計算心肌指數(shù)；固定左心室心肌組織，采用石蠟切片方法觀察組織病理學(xué)變化，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡發(fā)生情況；保存心肌組織制備組織勻漿測定細(xì)胞色素c含量、caspase-9激活水平、ATP酶和超氧化物歧化酶活性、丙二醛、ATP和糖原含量。此外，實驗延伸方面使用不同模式探索大鼠心肌細(xì)胞的急性分離方法。
　　結(jié)果

4、：⑴改良后的工作心臟灌流裝置可以使心臟存活時間達到90 min以上，滿足本實驗要求。⑵心肌指數(shù)和心肌酶：與正組相比模型組心肌指數(shù)和組織滲出肌酸激酶含量均有顯著性上升（p<0.01）；與模型組比較藥物組可使心肌指數(shù)和肌酸激酶含量下降，均達到顯著性水平（p<0.05、p<0.01）。⑶左心室收縮功能：CCLF能升高由缺血再灌注損傷引起的左心室最大收縮壓、左心室內(nèi)壓最大上升速率、主動脈血流量、冠狀動脈血流量、心輸出量和每搏輸出量的降低；降低損

5、傷引起的心率、左心室舒張末期壓、左心室內(nèi)壓最大下降速率、左心室壓力衰減的時間常數(shù)、收縮持續(xù)時間的升高，均有顯著性差異（p<0.05、p<0.01）。⑷抗氧化能力：模型組在灌注結(jié)束后心肌組織中MDA相比正常組增加顯著，CCLF對丙二醛的增加有調(diào)低作用；模型組中T-SOD、Cu-Zn-SOD和Mn-SOD活性均顯著性下降，藥物組中活性有一定的恢復(fù)，差異均有顯著性（p<0.05，p<0.01）。⑸能量代謝：模型組和正常組相比較組織中ATPas

6、e活性、ATP含量和糖原含量水平明顯下降，藥物組呈回升現(xiàn)象，差異性顯著（p<0.05，p<0.01）。⑹凋亡指標(biāo)：TUNEL結(jié)果顯示模型組無凋亡細(xì)胞存在；與對照組比較，模型組細(xì)胞色素C釋放量和caspase-9激活程度均顯著性升高，藥物組有下降趨勢，均有顯著性差異（p<0.05，p<0.01）。⑺酶解法分離得到的心肌細(xì)胞可以完成高阻封接，滿足膜片鉗實驗要求。
　　結(jié)論：對實驗結(jié)果的綜合分析顯示菟絲子黃酮對缺血再灌注損傷的心肌組織細(xì)