端粒酶活性和相關基因在再障患兒骨髓造血干細胞中表達的研究.pdf

1、再生障礙性貧血(簡稱再障，AplasticAnemia，AA)是由多種因素（包括物理、化學、生物、藥物及其他尚不完全明確的因素）造成骨髓造血衰竭的血液系統(tǒng)疾病，既往認為主要病理機制為骨髓造血干細胞數(shù)量和質量的異常及骨髓造血微環(huán)境的破壞，臨床表現(xiàn)為全血細胞的減少。該疾病治療療程長，治療效果差，病死率高，嚴重危害患者身心健康。然而直至目前，再障的發(fā)病機制仍不完全明了。
　　 既往研究認為AA的發(fā)病機制與免疫細胞及其活化信號異常密切相

2、關。而最近國內(nèi)外相關研究提示遺傳易感性特別是某些基因水平的異常改變在AA發(fā)病機制中發(fā)揮著不容忽視的作用。其中端粒酶活性及相關基因表達的異常在再障發(fā)病機制中的意義，越來越引起血液學研究者們的關注和興趣。
　　 端粒是真核細胞中染色體末端的特殊結構，能保護染色體在細胞分裂過程中，保持自身結構和功能的完整性，避免染色體發(fā)生端端融合、重組和丟失。但端粒自身存在與年齡相關的長度縮短，此時需要一種特殊的酶——端粒酶來補償這種丟失而維持端粒長

3、度。端粒酶由端粒酶RNA組分(TERC)與端粒酶逆轉錄酶(TRET)構成，它能夠以自身攜帶的RNA為模板在染色體末端添加端粒重復序列，在維持端粒長度和穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用。當端?？s短至一定范圍時，端粒酶活性表達的有無具有至關重要的作用。有研究表明再生障礙性貧血患者外周血粒細胞端粒長度縮短，且縮短程度與患者疾病持續(xù)時間存在相關性[1]。兒童骨髓造血干細胞增殖潛能較成人高，端粒相對縮短不明顯，那么再障患兒骨髓造血干細胞端粒酶活性水平表達如

4、何，是否隨端粒長度改變而變化，上述兩個端粒酶基因的表達在再障發(fā)病過程如何變化，目前尚未見相關研究報道。因此為明確以上疑問，我們進行了以下研究。
　　 目的：
　　 探討AA患兒骨髓造血干細胞端粒酶活性及端粒酶逆轉錄酶（hTERT）基因和端粒酶RNA組分(hTERC)基因的表達變化和關系，為再障診治及其判斷預后尋找新的參考指標。
　　 材料與方法：
　　 收集2011年6月-2012年6月鄭州大學第三附屬醫(yī)

5、院及第一附屬醫(yī)院經(jīng)臨床和實驗室初次確診的再障患兒65例為病例組，其中慢性再障(CAA)52例，急性再障(SAA)13例，同時收集鄭州大學第三附屬醫(yī)院就診并嚴格排除血液系統(tǒng)疾病及其他重大惡性腫瘤患兒21例作為對照組。3組患兒既往均未給予輸血及免疫抑制治療，且年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義。用重復序列擴增(TRAP)-PCR銀染法檢測3組患兒骨髓造血干細胞端粒酶活性，用實時熒光定量RT-PCR法分別檢測hTERTmRNA和hTERCmRNA的表

6、達水平。結果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，定量資料采用均數(shù)±標準差（(x)±S）表示，多組間比較以單因素方差分析進行，組間比較采用LSD法，關聯(lián)分析則采用線性相關分析，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義，以a=0.05為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1.端粒酶活性表達水平:CAA組為41.35±10.28、SAA組端粒酶活性31.86±8.54明顯高于對照組23.50±9.13(P＜0.01)，且CAA組平均端粒酶

7、活性較SAA組升高（P＜0.05）;
　　 2hTERTmRNA的表達水平:CAA組為9.86±1.10，SAA組為5.12±0.89，均高于對照組(1.17±0.73)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且CAA組高于SAA組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;
　　 3.hTERCmRNA表達水平:CAA組為1.23±0.50，SAA組為1.13±0.45，對照組為1.18±0.64，三組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.

8、812);
　　 4.端粒酶活性、hTERTmRNA及hTERCmRNA表達相關性:端粒酶活性高低與hTERTmRNA表達呈正相關(r=0.660,P＜0.01)，hTERCmRNA的表達與端粒酶活性無明顯相關性(P=0.193)，hTERTmRNA與hTERCmRNA表達無相關性(P=0.746)。
　　 結論：
　　 1.再障患兒骨髓造血干細胞端粒酶活性和hTERTmRNA表達水平升高，且慢性再障兒童兩者表達