重型再障異基因造血干細(xì)胞移植后CD3+T細(xì)胞嵌合狀態(tài)的臨床研究.pdf

1、目的：通過定量檢測(cè)重型再生障礙性貧血(Severe aplastic anaemia，SAA)患者異基因造血干細(xì)胞移植(allogene haemopoietic stem celltransplantation,allo-HSCT)后外周血(Peripheral blood，PB)、外周血CD3+T淋巴細(xì)胞的嵌合狀態(tài)，并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化，探討兩者的嵌合狀態(tài)及其與重型再障移植術(shù)后移植物抗宿主病(graft versus host dise

2、ase，GVHD)、移植排斥(Graft rejection，GR)以及不同預(yù)處理強(qiáng)度對(duì)供者細(xì)胞植入的影響。
　　方法:(1)研究對(duì)象：選取2013年12月至2014年12月在廣州市第一人民醫(yī)院血液內(nèi)科確診為重型再生障礙性貧血，并進(jìn)行異基因骨髓聯(lián)合外周血造血干細(xì)胞移植的重型再生障礙性貧血患者14例，其中男性9例，女性5例，中位年齡28歲(13-48歲)。此14例移植病例中，HLA全相合骨髓聯(lián)合外周血造血干細(xì)胞移植7例，其中同胞供者

3、6例，非親緣供者1例；HLA半相合(單倍體)移植7例；供者和受者性別相同10例，性別不同4例。(2)預(yù)處理方案:其中5例采用FCA方案，具體為氟達(dá)拉賓(Flu)120mg/ m2（分4天）+環(huán)磷酰胺(CTX)120mg/kg（分4天）+抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)10-12mg/kg（分4天）；7例采用Bu2CY+ATG方案，具體為白消安(Bu)0.8mg/kg q6h×2d+120mg/kg（分2天）+ATG10-12mg/kg（分4天

4、）；其余2例采用非清髓的CTX+ATG方案，具體為：CTX200mg/kg（分4天）+ATG10-12mg/(kg·d)（分4天）；(3)采取供者、患者移植前、移植后第7天(+7d),+14d,+28d、第2個(gè)月(+2m),+3m外周全血標(biāo)本各6mL，其中5mL采用免疫磁珠分選(MACS)純化出CD3+T淋巴細(xì)胞；然后對(duì)剩余全血及分選出CD3+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repe

5、ats，STRs)，結(jié)合全自動(dòng)毛細(xì)電泳技術(shù)檢測(cè)供體細(xì)胞的嵌合率，了解重型再障患者allo-HSCT移植后外周全血、外周血CD3+T淋巴細(xì)胞的嵌合狀態(tài)，觀察和分析兩種情況下形成嵌合體的時(shí)間早晚的差異、造血干細(xì)胞植入的快慢程度及其在 GR、GVHD發(fā)生等臨床干預(yù)中的規(guī)律。
　　結(jié)果:
　　14例重型再障移植患者均獲得成功植入，隨訪結(jié)果為：12例患者至今無(wú)病存活，存活率85.7％。2例患者分別因膽囊炎、肺部EBV感染后發(fā)生移植物排

6、斥死亡；4例患者發(fā)生Ⅰ度 aGVHD，4例患者發(fā)生Ⅱ度 aGVHD，1例患者發(fā)生Ⅲ度aGVHD。
　　1.移植后嵌合體的形成及其動(dòng)力學(xué)
　　在移植+7d時(shí)，所有病例的供者細(xì)胞的嵌合狀態(tài)均為 MC；外周血細(xì)胞的平均植入率為50%，CD3+T細(xì)胞平均植入率為25%，提示CD3+T細(xì)胞的植入較慢；+14d時(shí)，外周血、CD3+T細(xì)胞的嵌合狀態(tài)均已達(dá)到CC；+21d至+28d,外周血細(xì)胞的嵌合率一直處于CC，但有部分病例CD3+T細(xì)胞

7、的嵌合率開始出現(xiàn)由CC向MC轉(zhuǎn)化。
　　2.嵌合率與aGVHD的關(guān)系
　　在移植后+2m內(nèi)，CD3+T細(xì)胞達(dá)到高比例嵌合（DC≥90%）的11例患者中，有8例發(fā)生了aGVHD，發(fā)生率為72.7%；而在+2m內(nèi)CD3+T細(xì)胞供體嵌合率＜90%的3名患者中，沒有1例發(fā)生aGVHD。
　　3.預(yù)處理強(qiáng)度與供者細(xì)胞植入的關(guān)系
　　采用FCA和CTX+ATG預(yù)處理方案的病例在移植達(dá)到供者完全嵌合狀態(tài)后外周血和CD3+T細(xì)胞

8、均有出現(xiàn)由完全嵌合轉(zhuǎn)變?yōu)榛旌锨逗系默F(xiàn)象；采用化療強(qiáng)度較大的 BU2CY+ATG預(yù)處理的單倍體移植病例達(dá)到完全嵌合狀態(tài)后未發(fā)生混合嵌合狀態(tài)的轉(zhuǎn)變，供者造血干細(xì)胞在受者體內(nèi)的得到穩(wěn)定持續(xù)植入。
　　4.嵌合體與移植排斥的關(guān)系
　　移植后+21d，部分病例出現(xiàn)CD3+T細(xì)胞嵌合比例呈進(jìn)行性下降，而外周血細(xì)胞嵌合率開始下降時(shí)間晚于CD3+T細(xì)胞且下降幅度較低，血常規(guī)示各細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯波動(dòng)，考慮為分子學(xué)排斥。
　　結(jié)論: