2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、通過分析20多年來歐美已批準(zhǔn)上市的生物技術(shù)藥物,可以發(fā)現(xiàn)哺乳動物細胞高效表達系統(tǒng)已經(jīng)是生物技術(shù)制藥研究中的一項重要內(nèi)容。哺乳動物細胞作為表達天然活性蛋白的最佳宿主,具有易被轉(zhuǎn)染、遺傳穩(wěn)定、產(chǎn)物可分泌表達、并易于純化和大規(guī)模生產(chǎn)等方面的優(yōu)勢。但是與大腸桿菌表達系統(tǒng)相比,當(dāng)前的哺乳動物細胞表達系統(tǒng)還處在表達水平低、研發(fā)周期長、細胞大規(guī)模培養(yǎng)成本高的階段。因此,建立哺乳動物細胞高效的表達體系不僅能提高目的蛋白的產(chǎn)量,還能有效地縮短研發(fā)周期、節(jié)

2、省大量培養(yǎng)的費用,極大地推動了生物制藥行業(yè)生物技術(shù)藥物的發(fā)展。
   目前獲得高表達工程株最常用的方法是通過隨機整合方式篩選高表達株,采用的高效表達載體卻是多種多樣,大致分為基因擴增和非擴增兩種方式。以基因擴增方法來獲得高表達工程株是目前生物技術(shù)制藥領(lǐng)域的主導(dǎo)形式,包括DHFR-MTX和GS-MSX兩種方式,其特點是研發(fā)周期長。而以非基因擴增的方式來獲得高表達工程株正逐漸興起,采取的主要形式包括選擇強啟動子,弱化篩選基因啟動子,

3、添加增強子、內(nèi)含子、絕緣子、核基質(zhì)附著區(qū)(SAR/MAR)、染色質(zhì)開放元件(UCOE)、反抑制元件(STAR)等。比起基因擴增來說,該方法具有研發(fā)周期短、獲得的高表達株外源蛋白產(chǎn)量相對比較穩(wěn)定。
   本研究構(gòu)建的高效哺乳動物細胞表達系統(tǒng)選擇以整合酶的方式輔助表達載體在宿主細胞染色體上的整合,采用的整合酶是一種能在哺乳動物細胞中高效作用的噬菌體φC31整合酶。為防止位置效應(yīng)帶來的影響,本研究還在報告基因綠色熒光蛋白(GFP)表達

4、框的兩側(cè)加有絕緣子cHS4,包括完整絕緣子和核心絕緣子兩種類型。為檢測構(gòu)建系統(tǒng)的有效性,實驗采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000共轉(zhuǎn)染表達φC31整合酶的質(zhì)粒和報告基因GFP的表達載體。實驗結(jié)果表明,φC31整合酶在哺乳動物細胞CHO中具有高效的介導(dǎo)作用,不僅能提高克隆細胞團的形成率,還可提高陽性克隆團的形成率。從隨機挑選的單克隆細胞株表達GFP的水平來看,攜帶有絕緣子cHS4的表達載體略高于隨機整合實驗組的GFP表達水平。比較

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