人釉原蛋白真核表達(dá)載體pcdna3.1amg在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系及哺乳動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)的研究

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文人釉原蛋白真核表達(dá)載體PcDNA3.1-AMG在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系及哺乳動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)的研究姓名：趙川江申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：章錦才20030416P c D N A 3 ．1 一A M G 能夠在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)和分泌，可以用于間接法基因治療以及基因工程體外制備重組釉販蛋白。②選擇成年家犬一只，在其下頜骨雙側(cè)磨牙區(qū)頰側(cè)常規(guī)翻瓣，去除第一磨牙近中根頰側(cè)牙槽骨、牙周韌帶和牙骨質(zhì)至釉牙骨質(zhì)界下6 m m

2、 ，造成牙周骨缺損模型，而后在兩側(cè)骨缺損區(qū)分別放置P c D N A 3 ．1 ．A M G ( 實(shí)驗(yàn)區(qū)) 和P c D N A 3 ．】( 對(duì)照區(qū)) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)液制備成的凍干粉3 0 0 r a g ，復(fù)位縫合粘骨膜瓣。術(shù)后8 周處死動(dòng)物，立即截取手術(shù)部位頒骨標(biāo)本制備組織學(xué)切片，光鏡下觀察牙周組織的再生情況。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)區(qū)有牙骨質(zhì)、牙槽骨和牙周韌帶的再生，牙骨質(zhì)再生達(dá)5 8 - 3 ％，新生牙骨質(zhì)為無(wú)細(xì)胞牙骨質(zhì)，有膠原纖維穿通；

3、牙槽骨再生為6 7 ．2 ％。對(duì)照區(qū)牙骨質(zhì)和牙槽骨再生均不明顯，分別為8 ．3 ％和1 0 ．7 ％。表明重組質(zhì)粒在C O S ．1 細(xì)胞的表達(dá)產(chǎn)物具有正常的生物學(xué)活性。實(shí)驗(yàn)二重組質(zhì)粒P c D N A 3 ．1 - A M G 在小鼠肌肉組織內(nèi)的表達(dá)選取B a l b ／C ( 2 0 ．2 5 9 ) 雌性小鼠2 只，于小鼠右側(cè)小腿脛前肌同一部位處注射質(zhì)粒，第一只注射重組質(zhì)粒P c D N A 3 。1 - A M G 共1 0 0

4、 9 9／2 0 0 9 Id d H 2 0 ，第二只注射質(zhì)粒P c D N A 3 ．1 共1 0 0 9 9 t 2 0 0 9 l d d H 2 0 ·于注射后7 天處死小鼠，將小鼠肌肉標(biāo)本制備成組織學(xué)切片，L S A B法檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)。免疫組化染色結(jié)果顯示，注射P c D N A 3 ．1 - A M O 的艦肉組織的艦細(xì)胞和細(xì)胞問(wèn)質(zhì)中均有明顯的棕色著色：而注射P c D N A 3 ．1 的肌肉組織的肌細(xì)胞